磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。

总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。

产品组成：

溶液的配制：

1、试剂一：强腐蚀性，强氧化性；

2、试剂三：临用前配制，加入5ml蒸馏水，溶解后再加入2.5ml试剂二，混匀；

3、标准品：1mmol/L无机磷标准液。

技术指标：

最低检出限：0.0338mmol/L

线性范围：0.625-8mmol/L

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水和浓硫酸。

操作步骤(仅供参考)：

一、有机磷提取(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

称取约0.1g组织于带盖试管中，加浓硫酸1ml，盖紧(封口膜封口，防止水分散失)后沸水浴10min左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水3.8ml，充分混匀；室温，10000rpm，离心10min，取上清液，待测。

二、测定步骤

1.可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.打开水浴锅，调节温度到40℃

3.样本测定：

混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于660nm测定吸光度，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。

三、组织无机磷含量计算

总磷含量(mmol/g质量)= [C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]×V总÷W=0.005×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W

C标准液：1mmol/L；V总：上清液总体积，5ml=0.005 L；W：样本质量，g。

注意事项：

1.试剂三需临用前配制，限当天使用。

2.测定前先用1～2个样本做预实验，如吸光值大于1.5，需用蒸馏水做相应稀释