正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。

总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。

产品内容：

试剂一：液体10ml×1瓶，4℃保存(强腐蚀性，强氧化性)。

试剂二：液体11ml×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×2瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入10ml蒸馏水，溶解后再加入5ml试剂二，混匀。

标准品：液体1ml×1支，1mmol/L无机磷标准液，4℃保存。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。

操作步骤：

一、有机磷消化：

取带盖试管，进入精确称取约0.1 g组织，加浓硫酸1.0 ml，盖紧(防止水分散失)后沸水浴10min左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水3.8 ml，充分混匀；室温，10000rpm，离心10min，取上清液，待测。

二、测定：

1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.打开水浴锅，调节温度到40℃。

3.测定：

混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于660nm测定吸光度，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。

三、组织总磷含量计算：

总磷含量(mmol/g FW)= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W=0.005×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W

C标准液：1mmol/L；V总：上清液总体积，5ml=0.005 L。W：样品质量，g。

注意事项：

1、试剂三需临用前配制，限当天使用。

2、测定前先用1～2个样品做预实验，如吸光值大于0.8，需用蒸馏水做相应稀释。