注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca²⁺桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。

利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶(CSP)，其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530nm处有最大吸收峰。

产品内容：

提取液一：80%乙醇，自备。即将80ml无水乙醇和20ml蒸馏水混合。

提取液二：液体50ml× 1瓶，4℃保存。

提取液三：液体70ml× 1瓶，4℃保存。

试剂一：浓硫酸30ml，自备。

试剂二：液体3ml×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体5ml× 1瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1支，10mg半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入0.943ml提取液三，配成50μmol/ml的标准液。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、共价结合型果胶的提取：

取约0.1g样本，加入1ml提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5ml提取液一和丙酮交替各洗2遍(涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可)，沉淀即为粗细胞壁，加入1ml提取液二(去除淀粉)浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，加入1ml提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

二、测定步骤：

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。

2、将50μmol/ml标准液用提取液三稀释为0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/ml的标准溶液备用。

3、操作表：

三、共价结合型果胶含量的计算：

1、标准曲线的绘制：以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的△A标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将△A测定带入方程得到x(μmol/ml)

2、共价结合型果胶含量的计算：

共价结合型果胶含量(μmol/g鲜重)= x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三：加入提取液三的体积，1ml；W：样本鲜重，g。

注意事项：

1、浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。

2、若△A超过0.3，可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。