果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca²⁺桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。

利用带有螯合剂的酸性提取液提取离子结合型果胶(ISP)，其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530nm处有最大吸收峰。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

1.提取液一：80%乙醇，自备。即将80ml无水乙醇和20ml蒸馏水混合。提供一个125ml空瓶。

2.试剂一：浓硫酸30ml，自备。

3.标准品：10mg半乳糖醛酸。临用前加入0.943ml提取液三，配成50μmol/ml的标准液。

技术指标：

最低检出限：0.0946μmol/ml

线性范围：0.1-2μmol/ml

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.取约0.1g样本，加入1ml提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5ml提取液一和丙酮交替各洗2遍(涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可)，沉淀即为粗细胞壁，加入1ml提取液二(去除淀粉)浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，加入1ml提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

二、测定操作

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，分光光度计蒸馏水调零。

2.将50μmol/ml标准液用提取液三稀释为2、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/ml的标准溶液备用。

3.操作表：

三、离子结合型果胶含量的计算

1.标准曲线的绘制：以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x(μmol/ml)。

2.离子结合型果胶含量的计算：离子结合型果胶含量(μmol/g质量)=x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三：加入提取液三的体积，1ml；W：样本质量，g。

注意事项：

1.浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。建议每次实验冷却时间保持一致。

2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。