正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

果糖是一种最为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中，能与

葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。在酸性条件下果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。

产品内容：

提取液：液体100ml×1瓶，4℃保存；

试剂一：5mg/ml标准液1ml×1支，4℃保存；

试剂二：液体40ml×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体10ml×1瓶， 4℃保存；

试剂四：粉剂0.5g×1瓶，常温保存。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。

操作步骤：

一、果糖提取：称取约0.1g样本，常温研碎；加入1ml提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于80℃水浴锅中  10min(盖紧，以防止水分散失)，振荡3～5次，冷却后，4000g，常温离心10min，取上清；加入少量(约 2mg)试剂四，80℃脱色 30min(盖紧，以防止水分散失)；再加入1ml提取液，4000g，常温离心10min，取上清液测定。

二、测定操作表(在 1.5ml EP 管中依次加入下列试剂)：

1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

混匀，80℃水浴内反应10min(盖紧，以防止水分散失)，冷却后测定480nm处光吸收值,记为A空白管、A标准管、A测定管，并计算△A测定=A测定管-A空白管、△A标准=A标准管-A空白管。

果糖含量计算：

1、按蛋白浓度计算

果糖含量(mg/mg prot)＝ C标×△A测定÷△A标准×V样总÷(Cpr×V样总)＝5×△A测定÷△A标准÷Cpr

2、按样本鲜重计算

果糖含量(mg/g鲜重)＝ C标×△A测定÷△A标准×V样总÷W ＝10×△A测定÷△A标准÷W

C标：标准品浓度，5mg/ml；W：样品鲜重，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；V样总：提取液体积，2ml。

注：

如果测定管的OD值大于0.6，请用提取液稀释样品。