果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bispHospHatase，FBP)又称果糖-1,6-二磷酸酯酶，其在糖异生过程和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。催化1,6-二磷酸果糖和水生成6-磷酸果糖和无机磷。

FBP催化1,6-二磷酸果糖和水，生成6-磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADpH，测定340nm下NADpH的增加速率，即可计算FBP活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

1.试剂一：临用前加入20ml试剂四充分溶解待用，用不完的试剂于4℃保存。

2.试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前加入1.1ml蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

3.试剂三：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前加入1.1ml蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

试验中所需的仪器和试剂:

紫外分光光度计/酶标仪、天平、低温离心机、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、蒸馏水。

操作步骤 (仅供参考) ：

一、样品处理理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.组织：按照质量(g)：提取液体积(ml)为 1：5～10的比例(建议称取约 0.1g，加入 1ml提取液)进行冰浴匀浆。于 4℃，8000g，离心 10min，取上清，置冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量(10⁴个)：提取液体积(ml)为 500～1000：1的比例(建议 500万细胞加入 1ml提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率 300w，超声 3秒，间隔 7秒，总时间 3min)，于 4℃，8000g，离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热 30min以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2.将试剂一 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10min。

3.操作表：(在微量石英比色皿/96孔 UV板中依次加入下列试剂)。

在微量石英比色皿/96孔 UV板中分别加入上述试剂，充分混匀后于 340nm处测定 10s时的吸光值 A1，迅速置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴或培养箱 5min(酶标仪有控温功能可直接调节温度)，拿出迅速擦干测定 310s时的吸光值 A2，计算ΔA测定管=A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。(空白管只需做 1-2次)三、FBP 含量计算

1.按蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg组织蛋白每分钟生成 1nmol的 NADpH定义为一个酶活力单位。

FBP(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×10⁹×V反总÷(Cpr×V样)÷T=321.5×ΔA÷Cpr

2.按样本质量计算

单位的定义：每 g组织每分钟生成 1nmol的 NADpH定义为一个酶活力单位。

FBP(U/g质量)=ΔA÷(ε×d)×10⁹×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=321.5×ΔA÷W

3.按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每 104个细菌或细胞每分钟生成 1nmol的 NADpH定义为一个酶活力单位。

FBP(U/10⁴cell)=ΔA÷(ε×d)×10⁹×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))÷T=321.5×ΔA÷细胞数量(万个)

V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：NADpH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积，0.02ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/ml；W：样本质量，g；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

将上述公式中的 d-1cm改为 d-0.6cm(96孔 UV板光径)进行计算即可

注意事项：

1.当ΔA大于 0.6时，建议将样本稀释后再进行测量。

2.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过 0.02。