果糖是一种最为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。

在酸性条件下果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。

技术指标：

最低检出限：0.065mg/ml

线性范围：0.5-35mg/ml

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

试剂一：10mg果糖，临用前加1ml蒸馏水溶解，再用蒸馏水稀释为4mg/ml的果糖标准液。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

称取约0.05g样本，常温研碎；加入0.5ml提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于80℃水浴锅中10min(盖紧，以防止水分散失)，振荡3～5次，冷却后，4000g，常温离心10min，取上清；加入少量(约2mg)试剂四，80℃脱色30min(盖紧，以防止水分散失)；再加入0.5ml提取液，4000g，常温离心10min，取上清液测定。

二、测定步骤

1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。

2.样本测定(在1.5ml EP管中依次加入下列试剂)：

混匀，80℃水浴反应10min(盖紧，以防止水分散失)，冷却后取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中测定480nm处光吸收值，记为A空白管、A标准管、A测定管，并计算ΔA测定=A测定管-A空白管、ΔA标准=A标准管-A空白管。

三、果糖含量计算：

1.按样本蛋白浓度计算

果糖含量(mg/mg prot)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样总÷(Cpr×V样总)=4×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

2.按样本质量计算

果糖含量(mg/g质量)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样总÷W=4×ΔA测定÷ΔA标准÷W C标准管：标准管浓度，4mg/ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g。

注意事项：

如果样本吸光值大于1.1，建议将样本用提取液稀释后进行测定