注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。

S-PPO能够催化邻苯三酚产生紫色没食子素，后者在430nm有特征光吸收。

产品内容：

试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入12ml蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存；

试剂二：液体5ml×1瓶，4℃保存；

试剂三：乙醚，4℃保存(自备) ；标准液：液体10ml×1瓶，重铬酸钾溶液(5mmol/L)，相当于0.2mg/ml紫色没食子素溶液。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、乙醚(不允许快递)、30～50目筛、0.5mol/L HCL溶液、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过30～50目筛。

二、测定步骤

1、可见分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至430nm，蒸馏水调零。

2、标准液稀释：用0.5mol/L HCL溶液将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0mg/ml。

3、标准曲线的建立：以0mg/ml的标准液调零，取0.2ml稀释好的标准液于比色皿或96孔板中在430nm处测定吸光值A，根据吸光度(x)和浓度(y，mg/ml)做出标准曲线。

4、样本测定表

振荡数次，室温静置30min，蒸馏水调零，取200μL上层液于430nm处测定吸光值A。

三、S-PPO活性计算：

根据标准曲线，将样品吸光值A带入公式中(x)，计算出样品浓度 y(mg/ml)。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

S-PPO(mg/d/g土样)＝y×V提取相÷W÷T =516×y

T：反应时间，1h=1/24d；V提取相：提取相总体积，0.43ml；W：样品质量，0.02g。

注意事项：

乙醚易挥发，转移至酶标板时建议一次性不要测定太多样本。