注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

多聚半乳糖醛酸酶(EC₃.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白，可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，参与果胶的降解，使细胞壁结构解体，导致果实软化，与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御，细胞伸展发育以及木质化有关，在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

产品内容：

提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体20ml×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体25ml×1瓶，4℃避光保存。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤：

一、酶液提取

1、组织：按照组织质量(g)：提取液体积(ml)为1：5～10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液)，进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量(104个)：提取液体积(ml)为500～1000：1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后16000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

3、培养液：直接检测。

二、测定操作表

三、酶活性计算公式

标准曲线：y = 0.1544x - 0.1537，R² = 0.9996

1、按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/mg prot)=(△A+0.1537)÷0.1544 ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 129.53×(△A+0.1537)÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/g)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T= 129.53×(△A+0.1537)÷W

3、按液体体积计算

酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/ml)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总÷V样÷T= 129.53×(△A+0.1537)

4、按细胞数量计算

酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每104个细胞每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

PG活性(mg/h/10⁴cell)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T=129.53×(△A+0.1537)÷细胞数量

V反总：反应总体积，1ml；V样：反应中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。

注意事项：

1、测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。

2、煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活。