注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

多聚半乳糖醛酸酶(Ploygalacturonase, PG)属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540 nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540 nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

产品内容：

提取液：液体60ml×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10ml×1瓶，4℃保存。若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入10 ml蒸馏水，60℃水浴助溶。

试剂三：液体20ml×1瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1支，10 mg半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入0.943 ml蒸馏水，配成50 μmol/ml的标准液。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤：

一、粗酶液提取 ：

组织：按照质量(g):蒸馏水体积(ml)为1 : 5～10的比例(建议称取约0.1 g，加入1ml提取液)加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，16000 g，离心10 min，取上清置于冰上待测。

细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量(10 4个)︰提取液体积(ml)为500～100︰1的比例(建议500万个细菌加入1 ml提取液)，冰浴超声波破碎细菌(功率20%或200W，超声3 s，间隔7 s，总时间5min)；然后4℃，16000 g，离心10 min取上清置于冰上待测。

液体：直接检测或用提取液稀释后检测。

二、测定步骤 ：

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将50 μmol/ml标准液稀释为6、5、4、3、2、1.5 μmol/ml的标准溶液备用。

3、操作表：(在1.5ml离心管中)

二、测定操作表

三、PG酶活计算 ：

1、标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为 x轴，其对应的ΔA标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA带入方程得到 x(μmol/ml)

2、 PG酶活的计算：

(1)按蛋白浓度计算

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每毫克蛋白每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1 μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG酶活(U/ mg prot)= x×V提取÷(V提取×Cpr)÷T = 0.5x÷Cpr

(2)按样本质量计算

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每克样品每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1 μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG酶活(U/ g鲜重)= x×V提取÷W÷T = 0.5x÷W

(3)按照细菌数量计算

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每10 4个细菌每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1 μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG酶活(U/ 10 4 cell)= x×V提取÷T÷细菌数量(万个)=0.5x÷细菌数量(万个)

(4)按液体体积计算

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每ml样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1 μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG酶活(U/ ml)= x×V样÷V样÷T = 0.5x

V提取：加入提取液体积，1 ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；V样：反应体系中样本体积，0.025 ml；T：酶促反应时间，2 h。

注意事项：

1、样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。

2、当A大于2时，建议将样品用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以相应稀释倍数。

3、植物果实组织建议将样本稀释10倍或20倍后再测定。

4、若样本ΔA值偏小，建议延长酶促反应时间，并在计算公式中除以相应时间。