肌酸激酶CK催化三磷酸腺苷和肌酸,生成磷酸肌酸,后者很快全部水解为磷酸,此时三磷酸腺苷和二磷酸腺苷仍稳定,加入钼酸铵可生成磷钼酸,可进一步还原成钼蓝,根据生成无机磷的量可算出酶的活力。
肌酸激酶通常存在于动物的心脏、肌肉(骨骼肌和心肌)以及脑等组织的细胞浆和线粒体中,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶对研究急性心肌梗死有较高的科研价值
测定原理:
肌酸激酶 CK 催化三磷酸腺苷和肌酸,生成磷酸肌酸,后者很快全部水解为磷酸,此时三磷酸腺苷和二磷酸腺苷仍稳定,加入钼酸铵可生成磷钼酸,可进一步还原成钼蓝,根据生成无机磷的量可算出酶的活力。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约60分钟,可测24例左右样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效。
3、再现性好:变异系数CV=1.5%。
4、回收试验: X =96%。
5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
6、测试面广:可测动物血清(浆)、组织,效果均佳。
试剂组成与配制:(50 管/24 样)
试剂一:液体 6ml×1 瓶,冷冻或者 4°C保存 3 个月。
试剂二:液体 1.5ml×1 瓶,冷冻或者 4°C保存 3 个月。
试剂三:粉剂 2 支,临用时每支加双蒸水 2 ml,4°C保存 6 个月。
试剂四:粉剂 1 支,临用前每支加双蒸水 6ml, 4°C保存 6 个月。
试剂五:粉剂 2 支,冷冻保存 6 个月,临用时每支加双蒸水 2ml。配好后-20°C保存 5 天。
试剂六:液体 6ml×1 瓶,室温或 4°C保存 6 个月。
试剂七:粉剂×1 瓶,4°C保存 6 个月,加双蒸水 60ml,可适当加热溶解,溶解后 4°C保存。
试剂八:粉剂×2 瓶,4°C保存 6 个月,临用时每支加双蒸水 20ml,溶解后 4°C保存。
试剂九:50ml×1 瓶,室温保存 6 个月。
定磷剂的配制:试剂七︰试剂八︰双蒸水︰试剂九= 1︰1︰2︰1。配好的定磷剂应为浅黄色,若无色则失效,若呈蓝色则为磷污染,定磷剂需现用现配。配好后 4°C保存 48 小时。
附赠双蒸水 200ml,供配制试剂时用。
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/半自动生化分析仪(比色测定波长为660nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为45℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、按步骤加入样本和混合试剂
2、漩涡混匀,37℃孵育20分钟
3、加入R6, 3500r/min,离心10min
4、45C水浴15分钟,660nm波长,0.5cm光径,比色