糖化血红蛋白目前用作反映糖尿病患得到血糖在一段较长时间内(4-10)周的控制指标,血糖长期控制不良的,其糖化血红蛋白就会升高,因此糖化血红蛋白测定有助于控制,对糖尿病的周围血管和心血管并发症的研究有重要作用
测定原理:
血红蛋白中具有酮胺键的糖化血红蛋白在酸性环境中加热,使己糖部分脱水,生成 5-羟甲基糠醛(5-HMF)化合物,后者可与 TBA 反应呈黄色,然后进行比色定量。
产品优点如下:
1、稳定性:试剂盒2~8℃存放3个月有效
2、再现性:变异系数CV=1.7%
3、回收试验: X =101%。
试剂组成(15 管/14 样):
试剂一:液体 20ml×1 瓶,室温保存 6 个月。
试剂二:蛋白沉淀剂 20ml×1 瓶,室温保存 6 个月。
试剂三:显色剂 10ml×1 瓶,室温避光保存 3 个月。
试剂四:氰化高铁血红蛋白测试液 40ml×1 瓶,避光保存 3 个月。
操作过程:
1、红细胞洗涤:
取 EDTA 或肝素抗凝全血 2~4ml 置于带刻度离心管中,以 500~1000 转/分,离心 5~10 分钟,弃上清留沉淀的红细胞,然后用生理盐水按上述方法洗涤 2~3 次。(若来不及洗涤抗凝全血可放置 48 小时)
2、溶血液的制备:
①、取压积红细胞 1ml 加冷双蒸水 1.5ml,用手激烈震摇数分钟,或旋涡混匀器充分混匀 1 分钟制得溶血液,此溶血液-20°C保存,可放置 70 天。
②、溶血液的血红蛋白(Hb)浓度测定方法如下:取溶血液 10l 加试剂四 2.5ml,混匀,室温放置 10 分钟,用分光光度计在 540nm处,1cm 光径水调零测各管吸光度;将所得吸光度×0.3677 即为 Hb 的含量 g/ml 。
3、酸化:
取玻璃试管,标明“0”即空白管,“U”即测定管,在“0”管中加入双蒸水 2ml,“U”管中加入溶血液 2ml,然后各管均加入试剂一 1ml 酸化。加试剂一要缓慢,边滴边摇边加入。
4、水解:
将上述试管加橡皮塞或塑料薄膜,(用针戳一小孔再用橡皮筋扎紧,将玻璃管口封住)。置沸水浴中或干燥箱 100°C加热水解 1 小时。
5、显色:
①、各管加试剂二(蛋白沉淀剂)1ml,(遇天冷时,水解液可能会凝固,可再加温使其溶解。)加试剂二要缓慢,边滴边摇边加入。加完后在旋涡混匀器上混匀,再 3000~3500 转/分,离心 10 分钟。
②、取上清 2ml,各加试剂三(显色剂)0.5ml,40°C水浴保温 30 分钟。
③、冷却后,双蒸水调零、443nm、1cm 光径,测各管的吸光度。
计算公式:糖化血红蛋白的结果以每 10 克血红蛋白的吸光度表示: