机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系,该防御体系有酶促与非酶促两个体系,许多酶是以微量元素为活性中心,例如:超氧化物歧化
酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)等,非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金
属蛋白质。例如:VE、胡萝卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组氨酸、葡萄糖、铜兰蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等。这个体系的防护氧化作用主要通过三
条途径:(1)消除自由基和活性氧以免引发脂质过氧化;(2)分解过氧化物,阻断过氧化链;(3)除去起催化作用的金属离子。防御体系各成份之间相互起到
了协同作用,以及代偿作用与依赖作用。
测定原理:
ABTS 在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS·+,在抗氧化物存在时,ABTS·+ 的产生会被抑制,在 405nm 或 734nm 测定 ABTS·+ 的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox 是一种 VE 的类似物,具有和 VE 相近的抗氧化能力,用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。例如,Trolox 的总抗氧化能力为 1,相同浓度情况下,其它物质的抗氧化能力用其抗氧化能力和 Trolox 相比的倍数来表示。
用途:
用于血清、血浆、组织匀浆、细胞(或细胞上清)等中总抗氧化能力测定。
适用仪器:
各种类型的酶标仪或者可以测定微量样本的分光光度计。
样本前处理
1、血清(浆)、唾液、尿液、细胞上清等液体样本的制备:
血液样本采集后需及时分离血清或血浆,避免溶血,唾液、尿液、细胞上清等直接取样进行测定。血浆建议肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜采用 EDTA。
2、组织样本:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物, 4°C,12000 转/分,离心5分钟,取上清测定。
3、细胞样本
收集不少于 100 万细胞(建议细胞刮处理,不宜使用胰酶和 EDTA 消化),加入 200μl 冰冷的 PBS,匀浆或超声以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物,4°C,12000 转/分,离心 5 分钟,取上清测定。
注:组织或细胞样本制成匀浆后需要测定其蛋白浓度.