1 实验部分
1.1 仪器配置
LC1620A Plus 高效液相色谱仪泵一台
RI-201H 示差折光检测器1 台,
ERC-3215 在线脱气机一台
AD 适配器一套
GMP 软件一套
SHODEX NH2P- 50 4E 4.6mm*250mm 色谱柱一根
FA2004 电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司);
果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品(>97%,国药试剂);
乙腈(色谱纯,美国Tedia);
纯净水(杭州娃哈哈)。
1.2 标准品溶液配制
分别精密称取果糖对照品1.0g,葡萄糖对照品0.8g,置同一具塞锥形瓶中,精密加入40% 乙腈20ml,溶解,摇匀,作为果糖、葡萄糖对照品储备液。另精密称取蔗糖对照品0.2g,麦芽糖对照品0.2g,置同一具塞锥形瓶中,精密加人40 %乙腈10ml,溶解,摇勻,作为蔗糖、麦芽糖对照品储备液。分别精密量取果糖、葡萄糖对照品储备液和蔗糖、麦芽糖对照品储备液,加4 0 %乙腈配成不同浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖混合对照品溶液。
序号 | 混标浓度(mg/ml) | |||
果糖 | 葡萄糖 | 蔗糖 | 麦芽糖 | |
1 | 10 | 8 | 0.5 | 0.5 |
2 | 15 | 12 | 1.0 | 1.0 |
3 | 20 | 16 | 2.0 | 2.0 |
4 | 25 | 20 | 4.0 | 4.0 |
5 | 30 | 24 | 6.0 | 6.0 |
1.3 样品前处理
取蜂蜜约lg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加人4 0 %乙腈20ml,溶解,摇匀,滤过,取续滤液,作为样品溶液。
1.4 色谱条件:
色谱柱:Shodex NH2P-50 4E(4.6×250mm)
流动相:乙腈/水=75/25
流速:1.0ml/min
柱温:30℃
进样量:20ul
2 实验结果
2.1 标准曲线
将一系列浓度的标准溶液由低浓度到高浓度进样,以峰面积(纵坐标Y 轴)对标准品浓度(横坐标X 轴,mg/ml)进行线性回归,求算标准曲线,结果如下:
2.2 含量测定
2.2.1 样品中糖含量的测定
按“样品前处理” 操作制备样品,按上述所建立的HPLC 方法,对蜂蜜样品进行了分析。测定结果计算如下:
表1 蜂蜜含量的测定结果
项目 | A/果糖 | A/葡萄糖 | A/蔗糖 | A/麦芽糖 |
含量mg/ml | 21.1680 | 17.0152 | 0.0864 | 1.3158 |
含量(%) | 39.4788 | 38.3485 | 0.1754 | 1.5156 |
药典要求葡萄糖+果糖>60%,果糖/葡萄糖>1,蔗糖和麦芽糖<5%,符合药典要求。
蜂蜜样品的HPLC 谱图
3 结论
使用 LC1620Plus 泵配合 shodex 示差检测器,按药典方法操作,四种糖在Shodex NH2P-50 氨基柱上能得到良好的分离效果,按 3 倍噪声值计算,理论检出限为 0.2mg/ml,符合 2015 版药典的要求。