GDH(EC 1.4.1.2)广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。

GDH催化NH₄⁺、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

工作液的配制：在试剂二中加入19ml试剂一充分溶解，置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min。

试验中所需的仪器和试剂:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤 (仅供参考) ：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500万细菌或细胞加入 1ml提取液，超声波破碎细菌或细胞(功率 20%，超声 3秒，间隔 10秒，重复 30次)；8000g 4℃离心 10分钟，取上清，置冰上待测。

2.称取约 0.1g组织，加入 1ml提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1.紫外分光光度计/酶标仪预热 30min以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2.样本测定：

在微量石英比色皿或 96孔 UV板中加入 10μL样本和 190μL工作液，混匀，立即记录 340nm处 20s时的吸光值 A1和 5min 20s后的吸光值 A2，计算ΔA=A1-A2。

三、GOGAT 活性计算

a.按微量石英比色皿计算

1.按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg组织蛋白每分钟消耗 1nmol的 NADH定义为一个酶活力单位。

GDH(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V样)÷T=643×ΔA÷Cpr

2.按样本质量计算：

单位的定义：每 g组织每分钟消耗 1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDH(U/g质量)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样÷V样总×W)÷T=643×ΔA÷W

3.按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每 1万个细菌或细胞每分钟消耗 1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDH(U/10⁴ cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样÷V样总×500)÷T=1.286×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；109：单位换算系数，1mol =109nmol。

b.按 96 孔 UV 板计算：

1.按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDH(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V样)÷T=1072×ΔA÷Cpr

2.按样本质量计算

单位的定义：每 g组织每分钟消耗 1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDH(U/g质量)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样÷V样总×W)÷T=1072×ΔA÷W

3.按细菌或细胞数量计算

单位的定义：每 1万个细菌或细胞每分钟消耗 1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDH(U/10⁴cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样÷V样总×500)÷T=2.144×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm； V样：加入样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

注意事项：

1.当ΔA大于 0.5时，将样本进行稀释后测量。

2.由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约 1mg/ml)，所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。