淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。利用80%乙醇可以把样本中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。

产品内容：

溶液的配制：

1.标准品：临用前加入1ml蒸馏水使其溶解，制备10mg/ml葡萄糖标准液。

2.工作液的配制：临用前在试剂三中加入5.25ml蒸馏水后，缓慢加入29.75 ml浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。

技术指标：

最低检出限：0.0074mg/ml

线性范围：0.008-0.7mg/ml

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿或者96孔板、研钵、冰、浓硫酸(不允许快递)、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.称取约0.1g样本于研钵中研碎，加入1ml试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，常温离心5min，弃上清，留沉淀。

2.沉淀中加入0.5ml双蒸水，放入沸水浴中糊化15min(盖紧，以防止水分散失)。

3.冷却后，加入0.35ml试剂二，常温提取15min，振荡3-5次。

4.加入0.85ml双蒸水，混匀，3000g，常温离心10min，取上清液待测。

5.取上清液100μL加入300μL蒸馏水后即进行了四倍稀释测定。注：若稀释四倍后样本吸光度大于1.5或小于0.1，建议将样本再进行适当稀释或浓缩后测量。

二、测定步骤

1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。

2.调节水浴锅至95℃。

3.标准品的制备：将10mg/ml葡萄糖标准液进行稀释得到0.4、0.2、0.1、0.05、0.04、0.03、0.02mg/ml标准溶液备用。

4.标准品测定：取50μL标准溶液(蒸馏水做空白)和250μL工作液至EP管中，95℃水浴10min(盖紧，防止水分散失)，自然冷却至室温，取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中，在620nm波长下测定吸光度值A标准及A空白。计算ΔA=A标准-A空白。

5.样本测定：取50μL样本和250μL工作液至EP管中，95℃水浴10min(盖紧，防止水分散失)，自然冷却至室温，取200μL至微量玻璃比色皿/96孔板中，在620nm波长下测定吸光度值A测定。计算ΔAˊ=A测定-A空白。

三、淀粉含量计算

1.标准曲线绘制：以0.4、0.2、0.1、0.05、0.04、0.03、0.02mg/ml葡萄糖标准溶液为横坐标，ΔA为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔAˊ代入方程得到x(mg/ml)。

2.淀粉含量计算：

(1)按样本质量计算：

淀粉含量(mg/g质量)=x×稀释倍数×V提取÷W÷1.11=6.126x÷W V提取：提取后体积，1.7ml；W：样本质量，g；稀释倍数：(300μL+100μL)÷100μL =4；1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为淀粉含量的常数，即111μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100μg淀粉用蒽酮试剂显示的颜色。

注意事项：

1.由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。

2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。