正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究 S-NR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。

测定原理

S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO₃ˉ +NADH+H⁺→ NO₂ˉ +NAD⁺+H₂O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及 α-萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一：液体 12ml×1瓶，-20℃保存。

试剂二：液体 8ml×1瓶，-20℃保存。

试剂三：液体 9ml×1瓶，4℃保存(如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用)。

试剂四：液体 9ml×1瓶，4℃保存。

试剂五：标准品储备液 1ml，-20℃保存。

0.1μmol/ml标准液的配制：用时将试剂五稀释 100倍，即取 0.1ml加蒸馏水定容至 10ml。

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干，过 30～50目筛。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

试剂名称	1ml带盖离心管
试剂名称	测定管	对照管	标准管	空白管
风干土样(g)	0.06	0.06
0.1μmol/ml标准液(μL)			60
蒸馏水(μL)		225		285
试剂一(μL)	225		225
试剂二(μL)	75	75	75	75

混匀后，盖盖后 37℃水浴 24h，8000g 25℃离心 10min，取上清液

上清液(μL)	130	130	130	130
试剂三(μL)	85	85	85	85
试剂四(μL)	85	85	85	85

混匀，25℃显色 20min，4000g，25℃离心 10min，取 200uL上清液至微量石英比色皿或 96孔板中，540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

注意点：

务必先做 2 个样本的预测定，少部分土壤由于样本特殊性可能出现测定管小于对照管，请及时与我司技术支持联系，以获得针对样本特殊性的调整测定方法。

S-NR活性计算：

单位的定义：每天每 g土样中产生 1μmol NO₂的量为一个 S-NR活力单位。

S-NR(μmol/d/g土样)=C标准×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷W÷T=0.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

C标准管：标准管浓度，0.1μmol/ml；V反总：反应体系总体积，0.3ml；T：反应时间，24h； W：样本质量，0.06g。