产品介绍 意义:蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一。 蔗糖磷酸合成酶 (Sucrose phosphate synthase,SPS) (EC 2.4.1.14) 以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖 磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。 原理:蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化, 在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。 检测方法:微量法 产品组成及保存条件:
※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。 自备用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰。 粗酶提取: 按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液ES14),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 测定步骤: 1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。 2. 在 EP 管中依次加入下列试剂
注意:标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。 SPS 活力单位的计算:(1)按照蛋白浓度计算 单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 SPS 活性 (μg /min/mg prot) = {C 标准管×V1×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)}÷(V1×Cpr)÷T=100×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr ※ 蛋白定量检测建议使用本公司:BCA Protein Assay Kit (C05-02001) (2)按照样本鲜重计算 单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 SPS 活性 (μg /min /g 鲜重) = {C 标准管×V1×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)}÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W 注: C 标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入 提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间:10min。 |
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