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蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性检测试剂盒
蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性检测试剂盒图片
货号: AK235
包装: 100T/48S
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货号:AK235
产品别名:Sucrose Phosphoric Acid Synthetase Assay Kit
产品介绍

意义:蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一。

蔗糖磷酸合成酶 (Sucrose phosphate synthase,SPS) (EC 2.4.1.14) 以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖 磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。

原理:蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化, 在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

检测方法:微量法

产品组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

提取液 ES14

100mL×1 瓶

4℃保存;

AK235-A

2.5mL×1 瓶

-20℃保存;

AK235-B

10mL×1 瓶

4℃保存;

AK235-C

2mL×1 瓶

4℃保存;

AK235-D

25mL×1 瓶

4℃保存;

AK235-E

6mL×1 瓶

4℃保存;

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰。

粗酶提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液ES14),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。

2. 在 EP 管中依次加入下列试剂

试剂名称

测定管 (ul)

对照管 (ul)

标准管 (ul)

空白管 (ul)

上清

10

10



蒸馏水


45

45

55

AK235-B



10


AK235-A

45




混匀,25℃准确水浴10min

AK235-C

15

15

15

15

沸水浴中煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分散失),冷却

AK235-D

210

210

210

210

AK235-E

60

60

60

60

混匀,沸水浴 30min,冷却后,取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,480nm 下测 定各管吸光值。

注意:标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。

SPS 活力单位的计算:

(1)按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性 (μg /min/mg prot) = {C 标准管×V1×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)}÷(V1×Cpr)÷T=100×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr

※ 蛋白定量检测建议使用本公司:BCA Protein Assay Kit (C05-02001)

(2)按照样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性 (μg /min /g 鲜重) = {C 标准管×V1×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)}÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

注: C 标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入 提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间:10min。

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