检测原理:
Fenton 反应是最常见的产生羟自由基的化学反应,H2O2的量和Fenton反应产生的OH-量成正比,当给予电子受体后,用griess试剂显色,形成红色物质,其呈色与OH·的多少成正比关系。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约2分钟,可测48例左右样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效。
3、再现性好:变异系数CV=1.4%。
4、回收试验: X =98%。
5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
6、测试面广:可以观察机体的抗氧化能力强弱(测定血清/血浆及体液等)以及观察植物组织的氧合作用,并且可用于体外筛选抗活性氧效能强的食品、营养素、中草药、西药等
试剂组成与配制:(50 管/48 样)
试剂一:3%H2O2 标准品贮备液 0.5ml×1支,4°C保存 3 个月。
0.03%标准品应用液的配制:3%H2O2 标准贮备液∶双蒸水=1∶99 稀释,现用现配。
试剂二:底物贮备液 1ml×1支,4°C保存 3 个月。
底物应用液的配制:
①、若样本为抑制羟自由基,即测定管吸光度比对照管吸光度低,则底物应用液的配制:底物贮备液∶双蒸水=1∶99 稀释,现用现配。
②、若样本为产生羟自由基,即测定管吸光度比对照管吸光度高,则底物应用液的配制:底物贮备液∶双蒸水=1∶299 稀释,现用现配。
试剂三:甲液贮备液2ml×1支,4°C保存 3 个月,用时加双蒸水 1∶9 稀释成应用液。
乙液7ml×2支,4°C保存 3 个月。
试剂三应用液的配制:甲液应用液与乙液等比例混合,用多少配多少,余下4°C保存。
试剂四:液体 10ml×1瓶,4°C保存 3 个月。用时加双蒸水稀释至 100ml,制备成应用液,4°C保存。若有结晶,则放置 37°C水浴至全部溶解后再稀释。
试剂五:液体 30ml×1瓶,避光 4°C冰箱保存 3 个月。
试剂六:液体 30ml×1瓶,避光 4°C冰箱保存 3 个月。
试剂七:分析纯的冰乙酸(冰醋酸)自备。
显色剂的配制:试剂四应用液∶试剂五∶试剂六∶冰乙酸=8∶3∶3∶2,现用现配。
[注]: 抑制羟自由基的物质如:血清(浆)、各种组织匀浆液、口服液等;
产生羟自由基的物质如:中性白细胞、某些药物、部分植物等。
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为550nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、漩涡混匀器
4、微量移液器