重组激酶试验

在激酶缓冲液 [50 mmol/L HEPES (pH 7.5), 125 mmol/L NaCl and 48 mmol/L MgCl2] 中，加入FAK激酶结构域（氨基酸410 ~ 689）、50 μmol/L ATP以及10μ p(Glu/Tyr)。上述反应进行15分钟。再加入经1/2-Log系列浓度稀释的PF-562271，其最高浓度不超过1 μmol/L。每个浓度测试3次。加入一般的抗磷酸酪氨酸 (PY20) 抗体和辣根过氧化物酶 (HRP) 结合的山羊抗小鼠IgG抗体，测定p(Glu/Tyr)磷酸化。加入HRP底物，再加入终止溶液 (2 mol/L H2SO4)，于450 nm处读数。使用Hill-Slope模型测定IC50值。

细胞系

PC3-M细胞

制备方法

在DMSO中的溶解度大于25.4 mg/mL。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。

反应条件

1.1或3.3 μmol/L；48小时

实验结果

给予3.3 μM PF-562271，48小时后，PF-562271改变PC3-M细胞的细胞周期进程。然而，未能检测出PF-562271对cdk5/p35酶的抑制活性。

动物模型

携带U87MG人成胶质细胞瘤细胞的裸鼠

给药剂量

3.3、10或33 mg/kg；口服给药

实验结果

在携带U87MG人成胶质细胞瘤细胞的裸鼠中，PF-562271呈剂量和时间依赖性地抑制FAK磷酸化。给予33 mg/kg PF-562271，1小时后，最大的pFAK抑制达78%。然而，单次口服给予PF-562271后，其FAK磷酸化抑制作用 (> 50%) 持续4小时以上。计算的EC50值为93 ng/mL。

注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Roberts WG, Ung E, Whalen P, Cooper B, Hulford C, Autry C, Richter D, Emerson E, Lin J, Kath J, Coleman K, Yao L, Martinez-Alsina L, Lorenzen M, Berliner M, Luzzio M, Patel N, Schmitt E, LaGreca S, Jani J, Wessel M, Marr E, Griffor M, Vajdos F. Antitumor activity and pharmacology of a selective focal adhesion kinase inhibitor, PF-562,271. Cancer Res. 2008 Mar 15;68(6):1935-44. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-07-5155.