微管蛋白聚合实验

纯化牛脑微管蛋白 (MTP) （含约15% ~ 20%微管相关蛋白）。用于 Epothilone B-微管蛋白研究的缓冲液（MES缓冲液）含0.1 M 2-吗啉乙磺酸 (MES)、1 mM EGTA、0.5 mM MgCl2以及3 M甘油，其pH为6.6。将电子显微镜样本置于碳覆盖火棉胶片包被的网格上（300 个网孔），用2%乙酸铀酰进行负染色。在有或无Epothilone B存在的情况下，使用分光光度计和恒温调节液体循环器测定微管蛋白聚合。温度维持在35 °C，于350 nm处检测浑浊度变化（代表聚合物规模）。

细胞系

Hs578T和Hela细胞

制备方法

在DMSO中的溶解度大于25.4 mg/mL。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。

反应条件

100 nM；24小时

实验结果

在Hs578T和Hela细胞中，Epothilone B将细胞阻滞于G2-M期，引起细胞毒性。在经过Epothilone B处理的Hs578T细胞中，较多细胞（高达38%）显示出多核聚变。

动物模型

RPMI 8226细胞异种移植小鼠模型

给药剂量

4 mg/kg，单剂量，或每周2.5 mg/kg（在第6、13、20和27天给药）；静脉注射

实验结果

在RPMI 8226细胞异种移植小鼠模型中，Epothilone B (2.5 ~ 4 mg/kg) 延长存活期，同时抑制肿瘤生长。

注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Regueiro-Ren A1, Borzilleri RM, Zheng X, Kim SH, Johnson JA, Fairchild CR, Lee FY, Long BH, Vite GD. Synthesis and biological activity of novel epothilone aziridines. Org Lett. 2001 Aug 23;3(17):2693-6

[2]. Bollag DM, McQueney PA, Zhu J, Hensens O, Koupal L, Liesch J, Goetz M, Lazarides E, Woods CM. Epothilones, a new class of microtubule-stabilizing agents with a taxol-like mechanism of action. Cancer Res. 1995 Jun 1;55(11):2325-33.

[3]. Lin B, Catley L, LeBlanc R, Mitsiades C, Burger R, Tai YT, Podar K, Wartmann M, Chauhan D, Griffin JD, Anderson KC. Patupilone (epothilone B) inhibits growth and survival of multiple myeloma cells in vitro and in vivo. Blood. 2005 Jan 1;105(1):350-7.