资料参考

ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP) 可用于分析mRNA的递送和翻译效率。将ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP)转染到细胞后，细胞可表达EGFP（增强型绿色荧光蛋白）。EGFP蛋白是一种常见的报告分子，激发时会发出强烈且明亮的绿色荧光，其最大激发/发射光波长分别为488 nm /509 nm。该mRNA带有荧光染料Cyanine 5（简称Cy5）标记，用一定波长的光激发时可以直接可视化EGFP mRNA，Cy5的最大激发和发射波长分别为650 nm和670 nm。因此Cy5 EGFP mRNA是独立于翻译确定mRNA递送和定位的理想分子。

该产品已经是5’端加帽，3’端加poly(A)尾，以及经过5-moUTP和Cyanine 5-UTP修饰的mRNA。Cyanine 5-UTP与5-moUTP的添加比例是1:3。使用ARCA（抗反向帽类似物，货号B8175）以共转录的方式对mRNA进行加帽，形成了Cap 0结构，增加了mRNA的稳定性和翻译效率[1,2]。修饰核苷酸5-moUTP（也称为5-methoxy-UTP，货号B8061）的添加可以抑制RNA介导的先天免疫激活。Poly(A)尾的添加使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率[3]。

mRNA转染的优点：
· 无需核吸收——蛋白直接在细胞质中表达
· 其蛋白质表达比DNA转染更快
· 以完全不依赖启动子的方式表达蛋白质
· 没有基因组整合的风险
· 非常适合转染生长缓慢或不分裂的细胞
· 蛋白表达与mRNA的量直接相关
· 瞬时转染：蛋白质的表达在有限的时间内持续，避免了与积累有关的毒性

References:
[1] Stepinski J, Waddell C, Stolarski R, et al. Synthesis and properties of mRNAs containing the novel "anti-reverse" cap analogs 7-methyl(3'-O-methyl)GpppG and 7-methyl (3'-deoxy)GpppG. RNA. 2001;7(10):1486–1495.
[2] Jemielity J, Fowler T, Zuberek J, et al. Novel "anti-reverse" cap analogs with superior translational properties. RNA. 2003;9(9):1108–1122.
[3] Gallie DR, Tanguay R. Poly(A) binds to initiation factors and increases cap-dependent translation in vitro. J Biol Chem. 1994;269(25):17166–17173.