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EdU Imaging Kits(Cy5)
本产品不向个人销售,仅用作科学研究,不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。
EdU Imaging Kits(Cy5)图片
包装:50-500 tests
市场价:600元

产品介绍

描述

测量细胞增殖和细胞周期是评估细胞健康,确定遗传毒性和评估药物药效的基本方法。常用的方法是直接测量DNA的合成。在以往的实验中,有几种方法,例如掺入放射性核苷(3H-thymidine)或BrdU。在这里,我们介绍一种新方法,点击化学-CuAAC(铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应),以及使用该反应直接测量在细胞周期S期的DNA合成。 “点击化学”是K. B. Sharpless于2001年引入的一个术语,它是生物连接中常用的一组具有生物相容性的小分子反应,允许将底物与特定生物分子(例如报道分子)结合在一起。

胸腺嘧啶核苷类似物,EdU(5-ethynyl-2’-deoxyuridine)可以在DNA合成过程中掺入DNA链中。 EdU的炔基是一种生物惰性基团,可以通过CuAAC反应与染料的叠氮基发生极强的选择性反应,从而生成1,2,3-三唑产物。 EdU和Cy3 / Cy5 azide具有生物学上独特的基团,其连接后可以荧光标记增殖细胞的DNA,实验者可以获得低背景和高检测灵敏度。这种CuAAC反应可在极温和的条件下提供出色的区域选择性和定量转化。该反应是高效的,并且可以通过流式细胞术或荧光显微镜定量地使用。

EdU是BrdU的理想替代品,因为它不受苛刻的DNA变性条件(通常使用HCl,加热或用DNase消化)的影响。在基于BrdU的检测中,需要额外的DNA变性以使BrdU暴露于抗BrdU抗体,抗体与基于EdU的检测中使用的荧光染料相比是巨大的。与巨大的抗体不同,炔基和叠氮基的体积非常小,因此Cy3 / Cy5 azide在基于醛的标准固定和去污剂透化作用下就可以进入DNA。此外,基于BrdU的方法耗时且难以连贯的进行,BrdU的抗体可表现出非特异性结合,此方法所需的苛刻处理可能会对样品的完整性,细胞形态和图像质量产生不利影响。由于在基于EdU的测定中反应条件温和,因此您可以准确确定细胞增殖,同时保留细胞形态,DNA完整性,抗原结合位点。 DNA完整性的保留是您可以进行DNA染色,包括使用用于细胞周期分析的染料染色。

Cy3 azide(最大激发波长:555nm 最大发射波长:570 nm)

Cy5 azide(最大激发波长:646nm最大发射波长:662 nm)

组份和存储

EdU (Component A)5 mg
Cy5 azide (Component B)1 vial
DMSO (Component C)4 mL
10X EdU reaction buffer (Component D)4 mL
CuSO4 (100 mM aqueous solution) (Component E)1 vial
EdU buffer additive (Component F)400 mg
Hoechst 33342 (10 mg/mL in Water) (Component G)35 μL

存放于-20°C。

保持干燥并避光。

特性

操作简单,所需时间更少,无需变性步骤或苛刻的处理

效率高,亮度高

更好的保护细胞形态,抗原结构和DNA完整性

由于不使用可变的BrdU抗体,因此具有很高的一致性

常见问题解答

1)Q:不同货号的EdU可以检测多少个样品?

A:EdU Imaging Kits(货号K1075与K1076)如果用于培养的细胞(6孔板)的检测,可以检测50个样品,每个样品的反应体系为500 μL的cocktail反应液;如果用于12孔、24孔、48孔,96孔,384孔板样品的检测,分别可以检测125、250、350、500、1250个样品,每个样品推荐的反应液用量为200 μL、100 μL、70 μL、50 μL、20 μL;
EdU Imaging Kits(货号K1075与K1076)如果用于冰冻或石蜡切片的检测,可以检测125-250个样品,每个样品的反应体系为100-200 μL的cocktail反应液。 EdU Flow Cytometry Assay Kits(货号K1077与K1078)如果用于流式细胞仪检测,可以检测100个样品,每个细胞样品的细胞数量宜为10-100万,每个样品的反应体系为500 μL的cocktail反应液。

2)Q:EdU可否用于动物体内注射?

A:EdU可以通过注射或进食等方式进行动物的体内标记。如以小鼠为例,可以按照10-200 mg/kg的用量,用PBS配制成一定浓度的EdU,腹腔注射、特定组织或器官局部注射或者加入饮用水中,4小时后或根据特定实验确定的适当时间后,快速处死小鼠,取出所需的组织,按照常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。具体用量跟所用动物的种类、体重和使用方式有关。

3)Q:能否在活细胞中进行Click EdU检测?

A:不可以。Click反应体系中的叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测EdU信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。

4)Q:Cy3与Cy5有什么区别?

A:荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同(Cy3 azide最大激发波长555 nm, 最大发射波长570 nm;Cy5 azide最大激发波长646 nm,最大激发波长662 nm),两者的实验效果相同,可根据个人需求进行选择。

5)Q:样本检测不到EdU阳性信号?

A:可能原因及解决方案如下:

a) 所用试剂可能变质,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;

b) 确保样本发生增殖,可设置阳性对照以确认染色过程无误;

c) EdU处理时间太短,细胞实验一般EdU处理时间宜为细胞周期长度的1/5-1/10,阳性率约为20%-30%,动物实验一般根据目的组织细胞的增殖速度进行时间调整,若细胞增殖速度慢,可延长EdU处理时间;

d) 染色过程干片、固定和通透不充分等因素,实验操作要严谨。

6)Q:样本背景信号很强应该怎么处理?

A:可能原因包括:染色后洗涤不充分,可增加洗涤次数;染色过程中干片导致染料粘附严重;多聚甲醛固定时间过长;没有阳性信号而曝光过度导致背景严重等等,同时可以设置对照组(无染料或无Click反应)排除自发荧光干扰。