SCD1酶活性实验

使用大鼠肝脏微粒体或人类SCDl (hSCD-1)，通过测定放射性同位素标记的硬脂酰辅酶A转化为油酰辅酶A，以评价MK-8245对硬脂酰辅酶A去饱和酶的作用。雄性Wistar或Spraque Dawley大鼠进行高碳水化合物饮食。3天后，收获肝脏微粒体。使用含250 mM蔗糖，1 mM EDTA，5 mM DTT和50 mM Tris-HCl (pH 7.5) 的缓冲液，将肝脏按 (1:10 w/v) 分布均匀。按100,000 × g转速离心60分钟，将肝脏微粒体悬浮于含100 mM磷酸钠，20%甘油，2 mM DTT的缓冲液中，将其储存于-78 °C。使用人类SCDl（产生于杆状病毒Sf9表达系统）、细胞色素B5和细胞色素B5还原酶重新构建人类SCDl去饱和酶系统。将不同浓度的MK-8245溶于2 μL DMSO中，再加入180 μL SCD酶？（缓冲液组成：100 mM Tris-HCl (pH 7.5)，ATP (5 mM)，辅酶A (0.1 mM)，Triton X-100 (0.5 mM) 和NADH (2 mM)），将其置于在室温下，温育15分钟。加入20 μL [3H]硬脂酰辅酶A（终浓度为2 μM，,放射性浓度为1 μCi/mL)，开始反应。10分钟后，80 μL反应混合物与CaCl2/木炭水悬浮液（(10% w) 和25 μL CaCl2 (2N)）混合。离心后，沉淀具有放射活性的脂肪酸，使用闪烁计数器测定9,10-[3H]-硬脂酰辅酶A释放的氚化水（由SCD酶介导）。

细胞系

大鼠肝细胞

制备方法

在DMSO中的溶解度大于10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。

反应条件

＜ 200 nM

实验结果

在大鼠肝细胞（含具有功能的活性OATPs）中，MK-8245显著抑制SCD，其IC50值为68 nM。

动物模型

eDIO小鼠

给药剂量

3、10或30 mg/kg；口服给药

实验结果

MK-8245是一种肝靶向的小分子SCD抑制剂，能改善全身胰岛素敏感性。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Oballa RM, Belair L, Black WC, Bleasby K, Chan CC, Desroches C, Du X, Gordon R, Guay J, Guiral S, Hafey MJ, Hamelin E, Huang Z, Kennedy B, Lachance N, Landry F, Li CS, Mancini J, Normandin D, Pocai A, Powell DA, Ramtohul YK, Skorey K, S?rensen D, Sturkenboom W, Styhler A, Waddleton DM, Wang H, Wong S, Xu L, Zhang L. Development of a liver-targeted stearoyl-CoA desaturase (SCD) inhibitor (MK-8245) to establish a therapeutic window for the treatment of diabetes and dyslipidemia. J Med Chem. 2011 Jul 28;54(14):5082-96.