酶活性实验

测定酶催化的GST-IκBα磷酸化。在30℃下，将酶（IKK-2、IKK-1或IKK-ε，最终浓度为0.5 μg/mL）、100 μg/mL GST- IκBα和5μM [33P]ATP混合于40 mM Tris HCl（pH 7.5，含4 mM MgCl2，34 mM 磷酸钠，3 mM NaCl，0.6 mM磷酸钾，1 mM KCl，1 mM二硫苏糖醇，3% (w/v) 甘油和250 μg/mL牛血清白蛋白）中。在测定中，[33P]ATP的比活性为100 Ci/mmol。5分钟后，加入2× Laemmli样品缓冲液，将其置于90℃下加热1分钟，停止激酶反应。然后将样品转移到NuPAGE 10％ BisTris凝胶中。SDS-PAGE结束后，使用平板凝胶烘干机干燥凝胶。使用445Si PhosphorImager检测条带，并运用ImageQuant软件定量分析其放射性。在上述条件下，GST-IκBα磷酸化程度与时间和酶浓度呈线性相关。

细胞系

THP-1单核细胞

制备方法

溶于DMSO。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应条件

1 ~ 100 μM或0.04 ~ 25 μM; 60 mins

实验结果

BMS-345541呈剂量依赖性地抑制TNFα诱导的Iκ-Bα磷酸化 (IC50 = 4 μM)，并减少相应的TNFα、IL-1β、IL-8和IL-6合成 (IC50 = 1 ~ 5 μM)。

动物模型

雌性BALB/c小鼠

给药剂量

2 mg/kg (1 mL/kg)，静脉注射；10 mg/kg (5 mL/kg)，口服给药

实验结果

口服给予小鼠BMS-345541能使血清药物浓度在很长时间内维持在1 μM或高于1 μM。BMS-345541具有100%口服生物利用度。在剂量为10 mg/kg时，BMS-345541抑制50%由LPS诱导的TNFα合成。在剂量为100 mg/kg时，BMS-345541完全抑制TNFα合成。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Burke JR, Pattoli MA, Gregor KR, et al. BMS-345541 is a highly selective inhibitor of I kappa B kinase that binds at an allosteric site of the enzyme and blocks NF-kappa B-dependent transcription in mice. J Biol Chem, 2003, 278(3): 1450-1456.