JNK-IN-7

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JNK-IN-7

本产品不向个人销售，仅用作科学研究，不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。

CAS NO:

1408064-71-0

包装与价格：

包装	价格(元)
10mM (in 1mL DMSO)	电议
5mg	电议
10mg	电议
50mg	电议
100mg	电议

产品介绍

化学性质

Physical Appearance	A solid
Storage	Store at -20°C
M.Wt	493.56
Cas No.	1408064-71-0
Formula	C₂₈H₂₇N₇O₂
Synonyms	JNK inhibitor
Solubility	≥24.7 mg/mL in DMSO; insoluble in H2O; insoluble in EtOH
Chemical Name	3-[[(E)-4-(dimethylamino)but-2-enoyl]amino]-N-[4-[(4-pyridin-3-ylpyrimidin-2-yl)amino]phenyl]benzamid
Canonical SMILES	CN(C)CC=CC(=O)NC1=CC=CC(=C1)C(=O)NC2=CC=C(C=C2)NC3=NC=CC(=N3)C4=CN=CC=C4
运输条件	蓝冰运输或根据您的需求运输。
一般建议	为了使其更好的溶解，请用37℃加热试管并在超声波水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异，仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。溶液形式一般不宜长期储存，请尽快用完。

资料参考

JNK-IN-7是一种选择性的JNK抑制剂，作用于JNK1、JNK2和JNK3，IC50值分别为1.54 nM、1.99 nM和0.75 nM。JNK-IN-7也抑制c-Jun的磷酸化，c-Jun是JNK激酶的直接底物。

JNK-IN-8是JNK-IN-7的类似物，含有一个额外的甲基标志。与JNK-IN-7相比，JNK-IN-8显著改善选择性，并消除与IRAK1、PIK3C3、PIP4K2C和PIP5K3的结合。JNK-IN-7和JNK-IN-8对JNK2的抑制需要Cys116的存在。在细胞中，JNK-IN-7在相对高浓度（1-10 mM）时可抑制IRAK-1依赖性的pellino的E3连接酶活性，pellino在Toll受体信号通路中起作用。

IRAK1的抑制剂JNK-IN-7抑制IL-1R细胞中IL-1刺激的Pellino 1活化，而非RAW264.7巨噬细胞中Pam3CSK4刺激的Pellino 1活化。JNK-IN-7也抑制Pam3CSK4刺激的RAW巨噬细胞中c-Jun的磷酸化。

参考文献：
1. Zhang T, Inesta-Vaquera F, Niepel M et al. Discovery of potent and selective covalent inhibitors of JNK. Chem Biol. 2012 Jan 27;19(1):140-54.
2. Goh ET, Arthur JS, Cheung PC et al. Identification of the protein kinases that activate the E3 ubiquitin ligase Pellino 1 in the innate immune system. Biochem J. 2012 Jan 1;441(1):339-46.

试验操作

激酶实验 [1]:
基于细胞的c-Jun磷酸化测定	使用分别稳定表达GFP-c-Jun 1 ~ 79和GFP-ATF2 19 ~ 106的LanthaScreen c-Jun (1 ~ 79) HeLa细胞系进行基于细胞的c-Jun磷酸化激酶实验。通过测定铽标记的磷酸化c-Jun特异性抗体与GFP之间的TR-FRET以检测磷酸化程度。将细胞加入含白色组织培养液的384孔板中，每孔含10,000个细胞和32 μL测定液（Opti-MEM，含0.5%经过活性炭/葡聚糖处理的FBS，100 U/mL Penicillin，100 μg/mL Streptomycin，0.1 mM非必需氨基酸，1 mM丙酮酸钠，25 mM HEPES [pH 7.3]和少量酚红）。孵育过夜后，使用4 μL测定缓冲液将JNK-IN-7稀释到指定浓度，再将其加入到细胞中预处理90分钟，加入4 μL含5 ng/mL of TNF-α的测定缓冲液（最终体积为40 μL）孵育30分钟以激活细胞。吸除培养液，加入20 μL裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl [pH 7.6]，5 mM EDTA，1% Nonidet P-40 替代物，5 mM NaF，150 mM NaCl和1:100蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物，分别为P8340和P2850）裂解细胞。裂解液包括2 nM铽标记的抗c-Jun (pSer73) 测定抗体。在室温下，实验平衡60分钟，使用BMG Pherastar荧光板读取器测定TR-FRET发射率。测定参数为：在340 nm处激发，在520和490 nm处发射；100毫秒滞后时间；200微秒积分时间；发射率 = Em 520/Em 490。使用GraphPad Prism 4分析所有数据并绘图。
细胞实验 [2]:
细胞系	人IL-1R细胞和RAW264.7巨噬细胞
制备方法	溶于DMSO。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。
反应条件	0.1、1和10 mM；1小时
实验结果	在人IL-1R细胞中，JNK-IN-7抑制IL-1β诱导的c-Jun磷酸化和Pellino1活化。在Pam3CSK4诱导的RAW巨噬细胞中，JNK-IN-7也抑制c-Jun磷酸化。
References: [1]. Zhang T, Inesta-Vaquera F, Niepel M, et al. Discovery of potent and selective covalent inhibitors of JNK. Chem Biol, 2012, 19(1): 140-154. [2]. Goh ET, Arthur JS, Cheung PC, et al. Identification of the protein kinases that activate the E3 ubiquitin ligase Pellino 1 in the innate immune system. Biochem J, 2012, 441(1): 339-346.