趋化因子与CCR5结合的抑制作用

使用稳定表达受体的完整HEK-293细胞或膜样品，测定125I标记MIP-1α、MIP-1β和RANTES与CCR5结合的情况。将细胞以2 × 106 cells/mL的密度重悬于结合缓冲液（含1 mM CaCl2，5 mM MgCl2和0.5%牛血清白蛋白 [BSA] 的50 mM HEPES，其pH为7.4）中。为了制备膜样品，将经PBS冲洗的细胞重悬于裂解缓冲液（20 mM HEPES，1 mM CaCl2，每50 mL加1片COMPLETE，pH 7.4）中，然后将其置于Polytron手持匀浆器中搅匀，混合物在40,000 × g下超速离心30分钟，再重悬于结合缓冲液中，蛋白浓度为0.25 mg/mL（在96孔板中，每孔含12.5 μg膜蛋白）。制备125I标记的MIP-1α，MIP-1β和RANTES，使用结合缓冲液将其稀释，终浓度为400 pM。每孔加入Maraviroc稀释液，最终体积为100 μL，将实验板孵育1小时，使用预阻断和冲洗的Unifilter板进行过滤，对滤液进行计数，并将其烘干。

细胞系

PBMC或PM-1细胞

制备方法

在DMSO中的溶解度大于10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。

反应条件

0.01 ~ 10 nM；5天

实验结果

在PBMC或PM-1细胞中，Maraviroc在低纳摩尔浓度下作用于HIV-1 Ba-L，其IC90值为1.1 ~ 3.1 nM。然而，在浓度高达10 μM时，Maraviroc对细胞增殖没有影响。

动物模型

大鼠和犬

给药剂量

分别为74和21 ml/min/kg；静脉注射

实验结果

在大鼠和犬中，Maraviroc具有中度至高度的清除率，以及中度的分布体积 (4.3 to 6.5 liters/kg)。对于大鼠和犬，Maraviroc的半衰期分别为0.9小时和2.3小时。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Dorr P, Westby M, Dobbs S, et al. Maraviroc (UK-427,857), a potent, orally bioavailable, and selective small-molecule inhibitor of chemokine receptor CCR5 with broad-spectrum anti-human immunodeficiency virus type 1 activity. Antimicrob Agents Chemother, 2005, 49(11): 4721-4732.