CRT0044876

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CRT0044876

本产品不向个人销售，仅用作科学研究，不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。

CAS NO:

6960-45-8

包装与价格：

包装	价格(元)
10mM (in 1mL DMSO)	电议
20mg	电议
50mg	电议

产品介绍

化学性质

Physical Appearance	A solid
Storage	Store at -20°C
M.Wt	206.15
Cas No.	6960-45-8
Formula	C₉H₆N₂O₄
Solubility	≥55.56 mg/mL in DMSO; insoluble in H2O; ≥58.6 mg/mL in EtOH with gentle warming and ultrasonic
Chemical Name	7-nitro-1H-indole-2-carboxylic acid
Canonical SMILES	C1=CC2=C(C(=C1)[N+](=O)[O-])NC(=C2)C(=O)O
运输条件	蓝冰运输或根据您的需求运输。
一般建议	为了使其更好的溶解，请用37℃加热试管并在超声波水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异，仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。溶液形式一般不宜长期储存，请尽快用完。

资料参考

CRT0044876是一种有效的APE1选择性抑制剂,IC50值为3.06 μM[1] .

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1(APE1)是高度保守的AP核酸内切酶的核酸外切酶III家族的成员,在DNA修复中起着重要的作用.APE1具有3’-磷酸二酯酶活性和弱的3'-磷酸酶活性\3-’5’-外切酶活性和RNaseH活性[1].

CRT0044876是有效的 APE1选择性抑制剂.在HeLa全细胞提取物中,CRT0044876抑制由APE1催化的嘌呤/嘧啶(AP)位点裂解.CRT0044876同时抑制外切酶III 的AP核酸内切酶和核酸外切酶活性,外切酶III是APE1的细菌同源物.CRT0044876抑制APE1的3'-磷酸乙醇酸二酯酶活性,IC50值为5 μM,并且通过结合到APE1的DNA修复活性位点抑制3’-磷酸酯酶活性.在纤维肉瘤HT1080细胞中,CRT0044876显著增加AP位点积累,并且在浓度高达400 μM时无毒性.同时,通过对碱基切除修复(BER)通路的特异性抑制作用,CRT0044876增强烷化剂MMS\替莫唑胺\过氧化氢和hmdUrd 的细胞毒性[1].

参考文献：
[1]. Madhusudan S, Smart F, Shrimpton P, et al. Isolation of a small molecule inhibitor of DNA base excision repair. Nucleic Acids Res, 2005, 33(15): 4711-4724.

试验操作

激酶实验 [1]:
AP位点切割试验	BER反应缓冲液包含40 mM HEPES-KOH (pH 7.8)，5 mM MgCl2，0.5 mM DTT和0.1 mM EDTA。10 μL的AP位点切割反应体系包含BER缓冲液混合物，纯化的蛋白（APE1终浓度为3.3 nM）以及0.75 ng还原的AP位点双链核苷酸。将混合液置于37 °C下孵育1小时。加入1 μL反应终止液（50%丙三醇，10 mM Tris–HCl，1 mM EDTA，0.1%溴酚蓝以及0.1%二甲苯蓝）。将混合液置于90 ~ 100 °C下变性2分钟。然后将样品加载到15% TBE Criterion Pre-Cast Gel上，在30 mA恒定电流下，进行30分钟的电泳。使用磷光成像仪测定具有放射性标记的底物和反应产物。加入0.1 ~ 100 μM药物，测定其对APE1的抑制作用。使用ImageQuant软件对放射性条带进行定量分析。计算IC50值。
细胞实验 [1]:
细胞系	人类HT1080纤维肉瘤细胞
制备方法	在DMSO中的溶解度大于55.6 mg/mL。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。
反应条件	1 ~ 2小时
实验结果	在人类HT1080纤维肉瘤细胞中，CRT0044876显著增加去嘌呤/去嘧啶 (AP) 位点积累。使用磺酸甲基甲烷 (MMS) 处理HT1080细胞也能提升AP位点水平。CRT0044876与MMS联合使用导致AP位点水平进一步提升。
References: [1]. Madhusudan S, Smart F, Shrimpton P, et al. Isolation of a small molecule inhibitor of DNA base excision repair. Nucleic Acids Res, 2005, 33(15): 4711-4724.