C17,20-lyase活性实验

将微粒体稀释至最终蛋白质浓度为50 g/ml，加入含有0.25 M蔗糖、20 mM Tris-HCl（pH 7.4），10 mM G6P和1.2 IU/ml G6PDH的反应混合物中。在37℃下平衡10分钟后，通过加入NADP引发反应，获得0.6 mM的终浓度。在每个管中分配600 μl反应混合物之前，将测试化合物在氮气流下蒸发至干，然后在37℃下温育10分钟。Abiraterone孵育后，将500 μl反应混合物转移到含有1 M酶底物17OHP的试管中。再培养10分钟后，将管置于冰上，通过加入0.1 ml NaOH 1N来终止反应。将管子深度冷冻并在-20℃下储存，直到测定Δ4A水平。在我们的实验室中使用针对Δ4A的特异性抗体在微孔板上开发并自动化Δ4A RIA。用葡聚糖包被的炭悬浮液实现游离和结合的抗原分离。离心后，一式两份，在1450 MicrobetaPlus液体闪烁计数器中计数澄清上清液。从标准曲线确定未知样品的Δ4A浓度。检测限为0.5 ng/ml，在13 ng/ml的测定值下，测定实验内和实验间的变异系数分别为10.7和17.6％。酶反应速率表示为每10分钟和每mg蛋白质形成的p4MΔ4A。将没有抑制剂的最大活性值（对照）设定为100％。使用酶活性（％）对抑制剂浓度对数的曲线的非线性分析计算IC50值。

细胞系

LNCaP和VCaP细胞

制备方法

溶解度有限。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应条件

24 h-96 h

实验结果

Abiraterone是CYP17A1的抑制剂，用于治疗docetaxel治疗的去势抵抗性前列腺癌。Abiraterone抑制AR阳性前列腺癌细胞的体外增殖和AR调节的基因表达。

动物模型

成年雄性Wistar大鼠，重220–240 g

给药剂量

口服，10 ml/kg，每日一次，持续3天。

制备方法

溶于含有少量Tween 80的蒸馏水

实验结果

每天口服50 mg/kg治疗3天后，Abiraterone acetate显著抑制VP（-14％）和SV重量（-37%）而不影响肾上腺重量（-7%）。它还显著抑制T分泌（-48%），反过来增加LH浓度（192％）。

注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

1. Duc I, Bonnet P, Duranti V et al. In vitro and in vivo models for the evaluation of potent inhibitors of male rat 17alpha-hydroxylase/C17,20-lyase. J Steroid Biochem Mol Biol. 2003 Apr;84(5):537-42.

2. Richards J, Lim AC, Hay CW et al. Interactions of abiraterone, eplerenone, and prednisolone with wild-type and mutant androgen receptor: a rationale for increasing abiraterone exposure or combining with MDV3100. Cancer Res. 2012 May 1;72(9):2176-82. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-11-3980.