1、层析柱的寿命多久，可以用多长时间？

答：填料的使用次数依据不同的目的和条件而有差异。在使用过程中注意操作规范，定期清洁维护，可以使柱子保持较佳状态。

2、柱子堵了，超压如何处理？

答：可能原因 ：缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞 ；流速过快、流动相粘度 (如乙醇等 )过高、温度过低。

建议处理方法 ：首先将柱子卸下来，确定是系统还是柱子堵了。如果是柱子堵了 ：参考说明书 CIP操作进行清洁 ；更换层析柱顶端滤膜或超声清洗 。测定柱效或重复之前做过的样品。后续，注意样品前处理 (如核酸的去除、样品缓冲液条件 )以及层析柱的日常维护。

3、如何去除样品中的 DNA/RNA等核酸杂质污染？

答：延长超声时间以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase同时消化 DNA和 RNA。如果来源是大肠杆菌裂解液，含有大量的DNA，可以用链霉素沉淀等方法，预先去除大量的 DNA。

通过层析方法去除 ：由于核酸带负电，在阴离子柱上会结合或阳离子柱上流穿，也可以有效去除核酸。

去除填料上结合的核酸 ：一般采用 1M NaOH + 1M NaCl对核酸的去除效果较好(需要确认填料是否可耐受NaOH)。如果核酸的吸附过强，会采用强烈的方法，3M氯化钠去除靠静电吸附的核酸，然后用 1M的氢氧化钠分解核酸，之后再用 3M NaCl清洗。

可用Heparin预装柱或者填料：如果样品是核酸结合蛋白，Heparin可结合核酸结合蛋白，从而使核酸流穿。

4、柱子进气泡或跑干了，怎么办？

答：可能的原因 ：环境温度变化 ；缓冲液未经过脱气 ；层析柱连接系统或操作不当。

建议处理方法 ：用大量脱气去离子水或 20%乙醇反向高速冲洗层析柱，直到小气泡被带出 (冲洗过程建议在系统连接反压阀之后进行) 。如果大量进气，建议重新装柱。

5、不同样品检测的吸光度值？

答：蛋白样品*大吸收值一般在 280 nm，核酸或病毒在 254 nm或 260 nm ；多肽 215 nm ；多糖 206 nm。

6、柱子有色素如何去除？

答：色素性质很复杂，可以根据填料的耐受情况，优先尝试NaOH清洗，另外，也可以使用有机溶剂(如 30%异丙醇或乙醇)，最后再尝试酸，如 0.01 M HCl(需要确认填料耐受性)。如果去除不掉，可以定期把色素污染部分的填料去除。