基本信息
分子式 | C32H37N5O3 |
分子量 | 539.67 |
存储条件 | Freezer -20℃ |
产品描述
EPZ005687是一种有效的,选择性EZH2抑制剂,无细胞试验中Ki为24 nM,比作用于EZH1选择性高50倍,比作用于15种其他蛋白甲基转移酶选择性高500倍。
靶点(IC50 & Targe)
EZH2,24nM(Ki)
体外研究
EPZ005687抑制PRC2酶活性,这种作用具有浓度依赖性,IC50为54 nM。EPZ005687直接抑制PRC2酶活性,不通过破坏PRC2亚基之间的蛋白-蛋白相互作用而发挥功能。EPZ005687结合到EZH2 SET结构域的SAM口袋,是SAM竞争性的EZH2酶活性抑制剂。EPZ005687作用于含野生型和Tyr641突变型EZH2的PRC2复合体的亲和力是相似的(在2倍的范围内),而作用于A677G突变体酶则具有更显著的较高亲和力(5.4倍)。EPZ005687作用于多种不同的淋巴瘤细胞,减少H3K27甲基化。对含杂合Tyr641或Ala677突变型细胞具有强大的杀伤力,对野生型细胞增殖的影响最低。EPZ005687增加了细胞周期的G1期,相应地,降低S及G2/M期。EPZ005687作用于Tyr641突变的淋巴瘤细胞系,使已知的EZH2靶基因脱抑制,且影响EZH2 Tyr641突变特异性抑制的基因。[1]
激酶实验
生化酶学检验:
化合物与每孔40 μL 5 nM PRC2(50 μL中的实验终浓度为4 nM ) 在1X实验缓冲液(20 mM Bicine pH 7.6, 0.002% Tween-20, 0.005% Bovine Skin Gelatin 和 0.5 mM DTT)中温育30分钟。每孔10 μL底物混合物包括实验缓冲液3H-SAM,未标记的SAM,加入代表组蛋白H3残基21-44的肽(包含C-末端生物素,附加到C-末端酰胺封端的赖氨酸上),开始反应,终反应混合物中的每种底物都处于其各自的Km值,这种实验形式被称为“平衡条件”。终浓度底物与每组酶反应指定的甲基化状态的底物肽在室温下温育90分钟,然后每孔使用10 μL 600 μM 未标记的SAM淬灭,然后转移到384孔闪光板上,30分钟后进行洗涤。
细胞实验
Cell lines: OCI-LY19, WSU-DLCL2, Pfeiffer
Concentrations: ~10 μM
Incubation Time: 11 天
Method: 根据线性对数期生长,测定每组细胞的接种密度。进行细胞计数,实验第4和7天,在含EPZ005687的新鲜培养基中,细胞分裂回原来的接种密度。
(Only for Reference)
动物实验
参考文献
[1] Knutson SK, et al. Nat Chem Biol, 2012, 8(11), 890-896.
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