RI-1

基本信息

产品描述

RI-1是RAD51抑制剂，IC50为5至30 µM。

靶点（IC50 & Targe）

RAD51,<30μM

体外研究

RI-1通过直接和特异破坏HsRAD51和抑制RAD51，形成对单链DNA细丝的能力，提高细胞对DNA损伤的敏感性。此外，在所有三种癌细胞株（HeLa细胞，MCF-7和U2OS）中，RI-1单独产生单剂毒性，LD50值在20-40微米范围内。[1] RI-1减少了在G2期细胞的γ-H2AX灶，并导致在辐射6小时后未修复DNA双链断裂的升高。[2]

激酶实验

DNA结合检测:

所有反应均在黑色非结合性聚苯乙烯384孔板中进行，反应体积为30-100微升。纯化的DNA链交换的蛋白质和化学化合物预先在室温下孵育5分钟；然后进一步在37 ℃下孵育30分钟，使用100nM的单链DNA底物，它由在5'末端Alexa 488标签的45 -聚体的多-dT（合成并通过综合的DNA技术进行纯化）组成。反应在20 mM HEPES （pH值7.5）， 10毫摩尔氯化镁，0.25 μM BSA，2％甘油，30 mM氯化钠，4％DMSO和2毫摩尔ATP中进行。有些条件包括DTT或TCEP （三（2-羧乙基）膦）所指示。DNA结合是在Safire2酶标仪中测量荧光偏振（FP），使用以下设置：激发470 ± 5 nm，发射530 ± 5 nm，10测/孔，Z轴高度和G因子从对照孔自动校准。显示误差棒表示标准偏差。涉及蛋白质浓度的滴定实验中，数据拟合到该帐户用于协同性质由重组酶蛋白与DNA结合的方程式。对于涉及RI- 1的滴定实验中，蛋白质浓度为在不存在RI- 1得到的FP信号的〜80％的饱和度。

细胞实验

Cell lines: HeLa, MCF-7和U2OS细胞

Concentrations: ～35 μM

Incubation Time: 24 小时

Method: 细胞毒性是通过克隆形成能力的损失来确定。实验一式三份进行。结晶紫染色的菌落用CCD照相机成像，并使用NIH图像软件计数。误差线表示标准误差

(Only for Reference)

参考文献

[1] Budke B, et al. Nucleic Acids Res. 2012, 40(15), 7347-7357.

[2] Bee L, et al. PLoS One. 2013, 8(7), e69061.

安全信息

图形或危害标志
提示语	Warning
危险说明	H302 H410
防范说明	P264 P270 P273 P301+P312 P330 P391 P501
UN号码	3077
危险分类	9
包装等级	III