GW 5074

基本信息

产品描述

GW5074是一种有效的，选择性的c-Raf抑制剂，IC50为9 nM，对JNK1/2/3， MEK1， MKK6/7， CDK1/2， c-Src， p38 MAP， VEGFR2和c-Fms没有抑制活性。

靶点（IC50 & Targe）

C-Raf,9nM

体外研究

GW5074是有效的，特异性c-Raf抑制剂，IC50为9 nM,在体外对MEK6, MKK7, p38 MAP 激酶和cdks没有抑制活性。然而GW5074处理神经元培养基，使c-Raf和 B-Raf的激活修饰累积。GW5074处理小脑颗粒神经元，抑制LK诱导的凋亡，这种作用是非MEK-ERK依赖性的。GW5074延迟下调Akt活性，但通过Akt非依赖性机制抑制细胞凋亡。GW5074 影响Ras, NF-kappa B 和 c-jun。GW5074作用于颗粒细胞和其他神经元类型，抑制神经毒素引起的细胞死亡。[1]

体内研究

GW5074保护Huntington病的体内实验模型。GW5074(5 mg/Kg)处理小鼠，完全抑制3-NP诱导的双侧纹状体病变。[1]GW5074作用于稳定表达人类阿片受体的CHO细胞，完全废除慢性吗啡介导的AC 超活化I。[2]GW5074处理小鼠，抑制侧流烟雾引起的气道高反应性。[3]

激酶实验

亲和力测定:

通常使用纯化的激酶和合成的底物在标准条件下进行体外激酶实验。每组实验使用5-10 mU 纯化的激酶。GSK3β, cdk1, cdk2, cdk3, cdk5实验中,激酶与1 μM GW5074在含8 mM MOPS, pH 7.2, 0.2 mM EDTA, 10 mM 醋酸镁和c-33P-ATP的Buffer中在室温下温育40分钟。等样加到P30过滤器上，测量33P渗透率而定量分析激酶活性，然后在50 mM 磷酸中洗涤，进行闪烁计数。Buffer组成包含c-Raf, JNK1, JNK2, JNK3, MEK1, MKK6, MKK7，50 mM Tris pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 10 mM 醋酸镁和c-33P-ATP。使用的肽底物如下: c-Raf使用0.66 mg/mL MBP;cdks使用0.1 mg/mL 组蛋白 H1;JNKs使用3 μM ATF2; MEK1使用1 μM MAPK2; MKK6使用 1 μM SAPK2a，MKK7使用 2 μM JNK1α。

细胞实验

Cell lines: 皮层神经元

Concentrations: ～5 μM

Incubation Time: 24 小时

Method: HCA 稀释100倍，调节到pH 7.5。为了测评GW5074对HCA诱导的细胞毒性的影响，GW5074添加到HCA处理的皮层神经元中。24小时后，测定活力。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 处理50–55 mg/kg 3-NP 的8周大的 C57BL/6 雄性小鼠

Formulation: 溶于生理盐水

Dosages: 0.5–10 mg/kg

Administration: 腹腔注射

(Only for Reference)

参考文献

[1] Chin PC, et al. J Neurochem, 2004, 90(3), 595-608.

[2] Yue X, et al. Eur J Pharmacol, 2006, 540(1-3), 57-59.

[3] Lei Y, et al. Respir Res, 2008, 9(1), 71.