SB-505124

基本信息

产品描述

SB505124是一种选择性TGFβR抑制剂，作用于ALK4和ALK5，无细胞试验中IC50分别为129 nM和47 nM，也抑制ALK7，但不抑制ALK1，2，3或6。

靶点（IC50 & Targe）

ALK4,129nM

ALK5,47nM

体外研究

SB-505124抑制紧密相关的ALK4,IC50为129 nM，选择性比作用于 ALK5低2.5倍。SB-505124浓度高达10 μM时也不抑制ALK2。SB-505124 作用于COS-1细胞，也抑制内源性Smad2磷酸化。加入SB-505124不影响组成型活性 ALK1, ALK2, ALK3, 和 ALK6 磷酸化的Smad1。ALK4和ALK5 激活Smad1和Smad2，加入SB-505124抑制激活。SB-505124作用于HepG2人类肝癌细胞，C2C12小鼠成肌细胞和Mv1Lu水貂肺细胞，抑制TGF-β诱导的Smad2磷酸化，这种作用存在浓度依赖性。1 μM SB-505124也抑制活化素诱导的Smad2磷酸化。SB-505124有效抑制TGF-β和活化素诱导CAGA12-荧光素酶和ARE-荧光素酶受体结构的活力，这种作用存在浓度依赖性。[1] SB-505124可清除TGF-β1对E-钙粘蛋白启动子, mRNA和蛋白表达的抑制。[2] SB-505124 损害Smad2磷酸化和 CTGF与α-SMA的表达。 [3]

体内研究

SB-505124处理青光眼滤过手术中的滤过泡，持续10天以上，没有任何严重的术后并发症，并清楚地观察到滤泡。第一周眼内压 (IOP)低于10 mmHg，然而 SB-505124处理一周后，眼内压涨到10 mmHg。[4]

激酶实验

体外蛋白激酶实验:

65 nM GST-ALK5和 184 nM GST-Smad3 在50 mM HEPES, 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 1 mM 二硫苏糖醇, 和 3 μM ATP，在有或无SB-505124存在时进行激酶实验。反应和 0.5 μCi [33P]γATP在30oC下温育3小时。在 P-81 纸上收集磷酸化的蛋白, 使用0.5% 磷酸冲洗,然后在液体闪烁计数板上测量。另外, Smad3或Smad1蛋白覆盖到 FlashPlate Sterile Basic 微板上。然后在FlashPlates上，在相同实验环境下，使用ALK5激酶域， Smad3作为底物，或者ALK6(BMP 受体)激酶域，Smad1作为底物进行激酶实验。使用磷酸缓冲液冲洗实验板三次，然后在TopCount上计数。

细胞实验

Cell lines: COS-1和HepG2细胞

Concentrations: 0.01-5 μM

Incubation Time: 30分钟

Method: 使用修正的四唑盐WST-1测定细胞(如COS-1, HepG2 细胞系)活力。2×103个细胞接种在96孔板上，过夜。板中为无酚红培养基。用50 μL SB-505124 (获得指定终浓度) 处理细胞30分钟，然后使用TGF-β1和TNF-α处理，终体积为200 μL。每孔加入10 μL WST-1，在 37oC下温育3小时，然后在指定时间点测定细胞生长。使用酶联免疫吸附试验酶标仪直接测量代谢活跃的细胞裂解WST-1为水溶性的甲臜。每孔中的细胞系重复处理三次。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 雄性Sprague-Dawley大鼠，体重300 g

Formulation: Pluronic F127 gel

Dosages: 1 μM

Administration: 外用

(Only for Reference)

参考文献

[1] DaCosta Byfield S, et al. Mol Pharmacol. 2004, 65(3), 744-752.

[2] Hu T, et al. Am J Physiol Renal Physiol. 2005, 289(4), F816-825.

[3] Misumi S, et al. Eur J Neurosci. 2008, 28(6), 1049-1059.

[4] Goto N, et al. Cancer Sci. 2011, 102(8), 1501-1508.

[5] Sapitro J, et al. Mol Vis. 2010 ,16, 1880-1892.

[6] Chiasson VL, et al. Kidney Int. 2012 Apr 11. doi: 10.1038/ki.2