分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的，各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理——比耳定律。

T=I/I₀

Log I₀/I=KCL

A=KCL

其中：T——透射比

I₀——入射光强度I透射光强度

A——吸光度

K——吸收系数

L——溶液的光径长度

C——溶液的浓度

从以上的公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，分光光度计的基本原理是根据上述之物理光学现象而设计的。那么，分光光度计使用中有哪些需要注意的地方：

1、保护光源

光源灯有一定的寿命，仪器不工作时不要开灯，若工作间歇时间短，可不关灯。

一旦停机，则要待灯冷却后再重新启动，并预热15min。

灯泡发黑或亮度明显减弱或不稳定时，就及时更换。

经经紫外光照射后形成结痕可用无水乙醇去除。

2、保证合适的工作环境

温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。

不适宜的温度和湿度可引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的光洁度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；

造成光栅、反射镜、聚焦镜等光学部件的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等；

甚至使仪器停止工作，从而影响仪器寿命。

维护保养时应定期加以校正温度和湿度。

实验室，特别是地处南方地区的实验室，应具备四季恒温的仪器室，配备恒温设备。

环境中的尘埃和腐蚀性气体也可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电耦合器的可靠性，也是造成光学部件铝膜锈蚀的原因之一。

因此必须定期清洁，保障环境和仪器内卫生条件，防尘。

3、定期除尘、调校

仪器使用一定时间后，内部会积累一定量的尘埃，zui好由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作，同时将各发热元件的散热器重新紧固，对光学盒的密封窗口进行清洁，必要时对光路进行校准，对机械部分进行清洁和必要的润滑，zui后恢复原状，再进行一些必要的检测、调校和记录。

4、正确使用比色皿

拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。

清洗比色皿时，先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。若被比色皿被有机物沾污，可用盐酸-乙醇混合洗涤液(1:2)浸泡片刻，再用水冲洗。每次做完实验应立即洗净比色皿。

比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，以保护透光面。

测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减少测量误差。

若分光光度计噪音比较大，有可能是光源灯泡使用时间超过寿命期，可更换光源灯泡。

若自检时提示波长自检出错，有可能是自检过程中打开过仪器样品室的盖子，可关上仪器样品室盖子，重新自检。