产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D0020 | 质粒中量抽提试剂kit盒(通用型) | 50次 | 286.00元 |
碧云天的质粒中量抽提试剂kit盒(通用型) (Plasmid Midi Preparation Kit for All Purpose, Plasmid Midiprep Kit for All Prupose)是一种用于从大肠杆菌中进行中量质粒抽提的通用型离心柱式试剂kit盒。
本试剂kit盒不仅适用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 e等,也适用于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101等,能避免EndA+菌株中高丰度核酸酶的污染,并适用于从糖类修饰水平高的野生菌株中提取质粒。
野生型大肠杆菌中表达Endonuclease I,能切割并降解双链DNA。编码Endonuclease I的基因是endA,如果endA突变失活,其基因型会被标注为endA1,相应的突变菌株被称为EndA-菌株,而野生型菌株则被称为EndA+菌株。常见的EndA-和EndA+菌株参见附表1。从EndA+菌株中抽提的质粒,微量核酸酶和质粒结合而容易被共纯化,导致容易降解,而本试剂kit盒增加了特殊的洗涤步骤(核酸酶洗涤液溶液PB洗涤),可以避免EndA+菌株中抽提获得的质粒容易降解的问题(参考图1)。
图1. 使用溶液PB可以使从EndA+菌株JM110中抽提的质粒不易降解,而对于EndA-菌株DH5α中抽提的质粒没有影响。使用本试剂kit盒时,如上图所示,在使用和不使用溶液PB时的质粒得率一致。但对于EndA+菌株JM110,不使用溶液PB时从其中抽提获得的质粒在内切酶缓冲液Buffer Y中37℃孵育1小时后会全部降解,而使用溶液PB时同样孵育1小时就不会降解。对于EndA-菌株DH5α无论是否使用溶液PB,抽提获得的质粒的都很稳定。
本试剂kit盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的纯化。无需酚氯抽提,无需乙醇沉淀,12个样品只需不足60分钟即可完成。
无需高速冷冻离心机,只需普通台式高速离心机。所有操作均可在1.5ml离心管中完成。
每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为50微克。每个纯化柱可用于抽提5-10毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD260和OD280比值也会因菌种不同等原因而略有波动。
本试剂kit盒抽提所得到的质粒可直接用于转染细胞,DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化tissue,内切酶消化等。本试剂kit盒在使用溶液PB的情况下,获得的质粒的纯度更高,总体上转染细胞的效率会显著提高。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D0020-1 | 溶液I (悬浮液) | 45ml |
D0020-2 | 溶液II (裂解液) | 45ml |
D0020-3 | 溶液III (结合液) | 60ml |
D0020-4 | 溶液PB (核酸酶洗涤液) | 30ml |
D0020-5 | 溶液IV (洗涤液) | 18ml (初次使用前加入27ml) |
D0020-6 | 溶液V (洗脱液) | 8ml |
D0020-7 | RNase A (100mg/ml) | 45μl |
D0020-8 | 中抽质粒纯化柱及废液收集管 | 50套 |
— | 说明书 | 1份
|