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如何生成可靠的液相色谱 HPLC 结果?
2022.01.08   点击416次

         液相色谱HPLC 在分析研究和质量控制实验室中占有重要地位。与制造过程和研究结果发表有关的重要决定是基于 HPLC 系统生成的数据具有高度可靠性的情况下才能做出的决定。因为HPLC 是一个多组分系统,因此分析结果的准确性和可靠性取决于每个组分的性能水平。恒谱生本文介绍了一些有助于提高结果真实性的建议。

        流动相

       流动相的主要作用是将注入的样品运送到UPLC色谱柱,在色谱柱中分离后将各个组分转移到检测器进行识别和定量。流动相应在分析和HPLC开始前新鲜制备,并且溶剂不能含任何悬浮颗粒。使用溶剂进样口过滤器对溶剂进行过滤,避免杂质进入系统。恒谱生建议进一步使用恒谱生在线过滤器或保护柱安装在色谱柱前后能有效预防系统内产生的颗粒物污染柱子。

 色谱保护柱-DSC_8566

       流动相溶剂应该彼此完全混溶,并且注入的样品也应该混溶。使用缓冲液作为流动相组件时,切勿让缓冲液在系统内部变干,因为干燥时形成的盐会沉积并阻碍流动相的自由流动以及泵组件的损坏。

        样品

         大体积进样会导致峰形失真,也会使液相色谱柱过载。分析实验前需要检查样品与流动相的兼容性。如果溶解度较低,请尝试使用与流动相混合物极性相匹配的溶剂或溶剂组合。

       柱子

        色谱柱是 HPLC 系统的关键部件。它的正确保养和使用将大大有助于提供高可靠性的结果。操作流速和压力应该逐渐改变,这样这些变化就不会干扰固定相填料。使用恒谱生色谱保护柱还可以防止杂质进入主柱。由于流动相的流量取决于温度,因此强烈建议使用柱温箱以保持恒定的柱温以保持流速的一致性。

 色谱柱-DSC_6910-1

         泵

        在梯度分析的情况下,需要一个泵来根据软件程序保持流动相的组成。通过防止损坏泵部件并在发现任何可见损坏时及时更换此类部件来实现此类条件。视情况允许冲洗中等极性溶剂或纯水,逐渐冲洗泵。

        光源

        大多数 HPLC 分析可以使用 UV 光源进行。这种光源具有使用寿命。根据供应商的建议更换灯将有助于提高吸光度值的重现性。

        探测器

        检测器是 HPLC 系统的最终组成部分,可确认不同样品成分的存在并有助于对其进行量化。恒谱生建议定期离线清洁检测器,并在重新使用之前用水和流动相冲洗。切勿超过工作压力范围,以防止可能损坏检测器单元壁。

        恒谱生提供的建议会有助于提高结果的质量和准确性,仪器的定期清洗和校准,检查仪器是否正常使用也是非常重要的。仪器昂贵,需要细心使用,一些日常的检查和清洗过程能够有助于延长仪器使用寿命。


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