小鼠膜联蛋白Ⅴ（ANX-Ⅴ）ELISA免费代测试剂盒实验中一些常见的问题以及解决方法

问题序号可能原因解决方法显色淡，灵敏度偏低1 试剂盒未充分平衡试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）

2 样品不适合做ELISA检测样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）

3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥防止板过于干燥

4 包被抗体遭到破坏操作温和，移液枪不能碰到孔底

5 样本和抗体孵育条件不合适按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。

6 洗涤浸泡时间过长按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；

7 偶联HRP试剂污染弃去试剂，重新配置

8 错误的稀释偶联HRP试剂弃去试剂，重新配置

9 TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间确定合适的孵育时间：人为判定-最高浓度的标准品出现深蓝色；S4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65

10 样本浓度过高或存在基质效应建议做不同稀释倍数，确认样本最合适的稀释倍数。

11 酶标仪滤光片设置有问题或者波长选择不对确认仪器设置及选择正确的波长检测。

12 酶标板不适合做ELISA不能使用细胞培养板，建议使用ELISA专用高吸附力板子。