特性：

LS 174T(结肠腺癌细胞)安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

DIRC1 (Disrupted in renal carcinoma protein 1) ELISA KITMonkey MYO(Myoglobin) ELISA KitN-叔丁氧羰基-3-哌啶酮植物脊髓过氧化酶（MPO）活性比色法定量检测试剂盒

DNASE1L3(Deoxyribonuclease gamma) ELISA KitMonkey NGF(Nerve Growth Factor) ELISA Kit1-萘乙醇植物脊髓过氧化酶（MPO）活性高质敏感比色法定量检测试剂盒

DIRC2 (Disrupted in renal carcinoma protein 2) ELISA KITMonkey NTXI(Cross Linked N-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit1-萘乙醇植物脊髓过氧化酶（MPO）活性高质敏感（DTNB）比色法定量检测试剂盒

DNASE1L1 (Deoxyribonuclease-1-like 1) ELISA KITMonkey PAI1(Plasminogen Activator Inhibitor 1) ELISA Kit1-萘乙醇细胞一氧化氮（NO）活性比色法定量检测试剂盒

DET1 (DET1 homolog) ELISA KITMonkey PDGF-BB(Platelet Derived Growth Factor-BB) ELISA KitN,O-二甲基羟胺盐酸盐组织一氧化氮（NO）活性比色法定量检测试剂盒

DGKA (Diacylglycerol kinase alpha) ELISA KITMonkey Pg(Progesterone) ELISA KitN,O-二甲基羟胺盐酸盐血液一氧化氮（NO）活性比色法定量检测试剂盒

DISC1 (Disrupted in schizophrenia 1 protein) ELISA KITMonkey PTH(PaRathyroid Hormone) ELISA Kit1,4,5,8-萘四甲酸酐体液一氧化氮（NO）活性比色法定量检测试剂盒

DPCR1 (Diffuse panbronchiolitis critical region protein 1) ELISA KITMonkey RANTES(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit1,4,5,8-萘四甲酸酐细胞一氧化氮（NO）活性荧光定量检测试剂盒

PLEKHO2 ELISA KitCRMP1  二氢嘧啶酶相关蛋白1抗体(1-羟甲基环丙基)-叔丁氧羰基氨基巴马汀（黄藤，棕榈）进口/国产phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser64)  酸化4E结合蛋白1抗体含量：HPLC≥98%

PLCD3 ELISA KitIFI78/MX1  干扰素诱导蛋白P78抗体胰蛋白酶(牛胰脏)橙皮苷进口/国产phospho-eIF4EBP1(Thr37/46)  酸化4E结合蛋白1抗体含量：HPLC≥98%

PLCD4 ELISA KitADA/Adenosine deaminase  腺苷脱氨酶抗体胰蛋白酶(牛胰脏)新橙皮苷进口/国产phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser65/Thr70)  酸化eIF4E结合蛋白抗体含量：HPLC≥98%

Plexin B2 ELISA KitCryopyrin/CIAS1/NALP3  细胞凋亡诱导蛋白NALP3抗体胰蛋白酶(猪胰脏)柴胡皂苷B进口/国产phospho-EIF4EBP1(Ser100)  酸化eIF4E结合蛋白抗体含量：HPLC≥98%

PLCH1 ELISA KitCyclin B2  周期素B2抗体胰蛋白酶(猪胰脏)橙皮进口/国产phospho-EIF4EBP1(Ser111)  酸化eIF4E结合蛋白抗体含量：HPLC≥98%

PLCL2 ELISA KitPRX/periaxin  轴周蛋白PRX抗体邻苯二酚-3,5-二磺酸钠穿心莲内酯进口/国产EIF5  真核翻译起始因子5抗体含量：HPLC≥98%

PLCD4 ELISA KitCalumenin/CALU  钙腔蛋白邻苯二酚-3,5-二磺酸钠甘草酸进口/国产4EBP2  eIF4E结合蛋白2抗体含量：HPLC≥98%

Plexin B2 ELISA KitCD98  CD98重链抗原抗体2,4,6-三吡啶基三嗪甘草次酸进口/国产Cytokeratin 5/CK5  细胞角蛋白5抗体含量：HPLC≥98%

实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。