收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞的生长情况。如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下5ML于培养瓶里继续培养。如果细胞已长满,达到60-70%以上贴壁就要把细胞传代。先弃培养基,用PBS(不含钙.镁)洗一次,加0.5-1ml消化液(0.2%trypsin,0.53mMEDTA)于培养器皿中,放于37℃培养箱1-3分钟预热,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆后,加入培养基(含10%血清的任何培养基)终止胰酶作用,用巴氏吸管吸到离心管内离心(1000rpm,10分钟)弃胰酶,之后吸走上清,加HUVEC专用培养基5ML,轻轻打匀细胞后分到2个6孔板空中,放于培养箱中培养。一传二或三。培养条件:37℃,5% CO2条件下培养。 注:此细胞会成集落样生长,长不成致密的单层,细胞长到60-70%就要传代。收到细胞后的**次传代就用6孔板或一次性的塑料培养皿培养,否则细胞生长不好。 |