测定原理:
SDH催化山梨醇脱氢生成果糖,同时还原NAD+生成NADH,测定340nm吸光度增加速率可以计算SDH活性。
仪器设备:
可调式移液器、水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计、石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成:(50T/48 样)
提取液:液体60ml×1 瓶,4°C保存;
试剂一:液体20ml×1 瓶,4°C保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4°C保存;临用前每瓶加入15ml蒸馏水,用不完的试剂仍4°C保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20°C保存;临用前每瓶加入15ml蒸馏水,用不完的试剂仍-20°C保存。
操作步骤:
1、粗酶液提取:粗酶液提取详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。
2、操作表:
试剂(μl) | 测定管 |
试剂一 | 400 |
试剂二 | 300 |
试剂三 | 300 |
混匀,37°C(哺乳动物)或25°C(其它物种)准确水浴5min
将上述试剂按顺序加入1ml石英比色皿中,加样本同时计时,记录20秒
时的初始吸光度A1和2分钟20秒时的吸光度A2,计算△A=A2-A1。