检测原理:
线粒体呼吸链复合物III，通常称为辅酶Q－细胞色素C还原酶、细胞色素还原酶或bc1复合物（ubiquinol cytochrome c oxidoreductase；cytochrome reductase；bc1 complex），是线粒体电子传递链的中心元素：含有十一个亚单位，包括细胞色素b（Cytochrome b），细胞色素c1（cytochrome c1）和Rieske铁硫蛋白（Rieske iron-sulfurprotein），通过Q循环（Q cycle）进行催化作用。其特征性的酶活性是抗霉素敏感的辅酶Q－细胞色素C还原酶。复合物III催化氧化型细胞色素C被还原为还原型细胞色素C，线粒体内电子由供体还原型泛醌（ubiquinol；UQH2）或还原型辅酶Q（reduced Coenzyme Q；CoQH2）传递到细胞色素C上的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致心肌疾病。辅酶Q－细胞色素C还原酶反应系统测定氧化型细胞色素C的浓度变化。基于还原型泛醌或还原型辅酶Q底物，在抗霉素存在与否的情况下，通过辅酶Q-细胞色素C还原酶的催化，转化成泛醌（ubiquinone；UQ）或辅酶Q（Coenzyme Q；CoQ），同时氧化型细胞色素C，转化为还原型细胞色素C，在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（550nm 波长），由此定量测定辅酶Q－细胞色素C还原酶的特异活性。其反应系统是：
Complex III
CoQH2 + 2 ferricyt c3+ + 2H+-----------------> CoQ + 2 ferrocyt c2+ + 4H+
↓Abs 550 nm ↑Abs 550 nm
试剂组成：（20 管/10 样)）
缓冲液（Reagent A） 20 毫升
反应液（Reagent B） 125 微升
阴性液（Reagent C） 2 毫升
底物液（Reagent D） 500 微升
专性液（Reagent E） 200 微升
稳定液 A（Reagent F1） 4 管
稳定液 B（Reagent F2） 5 毫升
产品说明书 1 份
保存方式
-20°C冰箱保存，避免反复冻融；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D），避免光照，有效期3个月。
用户自备
比色皿：用于比色分析的容器
双波长分光光度仪：用于比色分析
培养箱：用于孵育反应物
实验步骤
实验开始前，将－20°C冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D）注意避光。
（一）、背景对照测定
1、移取 870 微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入 10 微升反应工作液
3、加入 20 微升底物液（Reagent D）
4、室温下静置 10 分钟，避免光照
5、加入 100 微升阴性液（Reagent C）
6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
7、即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：
550 波长读数 1 分钟或 2 分钟－550 波长读数 0 分钟
（二）、样品总活性测定
1、移取 870 微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入 10 微升 GENMED 反应工作液
3、加入 20 微升 GENMED 底物液（Reagent D）
4、室温下静置 10 分钟，避免光照
5、加入 100 微升待测样品（注意：15 微克总线粒体蛋白）
6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
7、即刻放入分光光度仪检测，此为样品总活性读数：
550 波长读数 1 分钟或 2 分钟－550 波长读数 0 分钟
（三）、样品非特异活性测定
1、移取 850 微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入 10 微升 GENMED 反应工作液，避免光照
3、加入 20 微升 GENMED 底物液（Reagent D）
4、室温下静置 10 分钟，避免光照
5、加入 20 微升 GENMED 专性液（Reagent E）
6、加入 100 微升待测样品（注意：15 微克总线粒体蛋白）
7、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
8、即刻放入分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：
550 波长读数 1 分钟或 2 分钟－550 波长读数 0 分钟
样品活性计算：
（1）、样品活性（总活性或非特异活性）
单位：μmol CoQH2/min/mgprot
（2）、样品特异活性
样品总活性－样品非特异活性＝样品特异活性
