磷脂酶 C(EC 3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯 C₃位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。

磷脂酶 C催化水解 NPPC产生对硝基苯酚，在 410nm处有特征吸收峰。

产品内容：

需自备的仪器和用品：

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤：

一、酶液提取

1.组织：按照质量(g)：提取液体积(ml)为 1：5～10的比例(建议称取约 0.1g，加入 1ml提取液)加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml试剂一。

2.细胞：按照细胞数量(10⁴个)：提取液体积(ml)为 500～1000：1的比例(建议 500万细胞加入 1ml提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率 300w，超声  3秒，间隔 7秒，总时间 3min)；然后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml试剂一。

3.血清：直接测定。

二、测定操作

三、酶活计算公式

标准曲线：y=0.0191x-0.0103，R2=0.9991

(1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样×Cpr)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/g鲜重)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷W

(3)按照细胞数量计算

酶活性定义：每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/10⁴cell)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷细胞数量

(4)按照液体体积计算

酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/ml)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷V样÷T=17.45×(△A+0.0103)

V反总：反应总体积，1ml；V样：加入样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。