您好,欢迎来到试剂仪器网! [登录] [免费注册]
试剂仪器网
位置:首页 > 试剂及耗材 > 生化试剂盒
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(微量法)
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(微量法)图片
货号:PMDH-1-Y
包装:100管/96样


产品介绍

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中 MDH 是 TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH  在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH, NADP-MDH 主要存在于真核细胞中。

测定原理:

NADP-MDH 催化 NADPH 还原草酰乙酸生成苹果酸,导致 340nm 处光吸收下降。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一、提取液 100 mL×1 瓶,在 4℃保存;

试剂二、液体 20 mL×1 瓶,在 4℃保存;

试剂三、粉剂×1 瓶,-20℃保存;

样本测定的准备:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制:用时在试剂三中加入 19mL 试剂二和 0.5mL 蒸馏水,充分混匀待用; 用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

3、测定前将检测工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 样本和 195μL 工作液,混匀后立即记录 340nm处 20s 时的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。

注意:若 A1-A2 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,使 A1-A2 小于 0.5,可提高检测灵敏度。

计算公式中乘以相应稀释倍数。

NADP-MDH 活力单位的计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)NADP-MDH 活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 NADP-MDH 活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/g  鲜重)=[ΔA×V  反总÷(ε×d)×109]÷(W  ×V  样÷V  样总)÷T=6430×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。 NADP-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×500)÷T=12.86×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.005 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)NADP-MDH 活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=12860×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 NADP-MDH 活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH(nmol/min/g  鲜重)=[ΔA×V  反总÷(ε×d)×109]÷(W×  V  样÷V  样总)÷T=12860×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。 NADP-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=25.72×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.005 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL; T:反应时间,1  min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500 万。

用户评论
产品评分
目前评分共0人
产品质量
售后服务
易用性
性价比
产品评论
已有0条评论
可以输入500字 
暂无评论!
广州伟伯科技有限公司
电话: 点击&查看
联系人: 林生
地址: 
同品牌产品:
相关产品:
猜您感兴趣
换一批
叶酸检测试剂盒
A+C群脑膜炎球菌多糖IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
农药残留胶体金检测卡
qEV细胞外囊泡(外泌体)分离柱qEV1/70 nm-5 Pack
BV阴道病联合检测试剂盒
来访登记
关闭
请留下您的联系方式,登记完成即可查看电话与供应商联系,或等候供应商联系您。
留言类型:
     
*姓名:
*电话:
*单位:
Email:
*留言内容:
请说明需求数量,型号规格以及纯度含量等要求。
*验证码: