维生素E(VE)是天然脂溶性抗氧化剂,它存在细胞膜性结构中(细胞膜、线粒体、微粒体)以及脂肪细胞的脂滴和循环的脂蛋白中。
VE不但是单线态氧和超氧阴离子自由基的清除剂,更重要的是脂质过氧化作用的阻断剂。从细胞水平的许多实验说明维生素E和So GSHPX协同地保护细胞免受脂质过氧化损伤。VE 尚能直接与蛋白硫自由基(pros)偶联,使蛋白巯基恢复活性,VE也可通过清除LOO间接地防止蛋白巯基丧失。而蛋白巯基是维护细胞生存的重要环节,因而VE是机体抗氧化的**道防线。当维生素E缺乏时,机体易受到自由基的攻击而表现出各种病理状态。例如:老年性白内障、早衰等。
测定原理:
VE 在菲罗啉的存在下,可使三价铁离子还原成二价铁离子,后者在特定的环境下可与菲罗啉形成粉红色复合物,通过比色,在标准曲线上可查出 VE 的含量,或者通过公式可计算出VE 的含量。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约30分钟,可测50例左右样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效。
3、再现性好:变异系数CV=1.7%。
4、回收试验: X =103.3%。
5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
6、测试面广:可测动物血清(浆)、组织、药物、饮料、口服液、食品等,效果均佳。
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为533nm)
2、台式离心机
3、漩涡混匀器
4、微量移液器
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
动物组织样本:用试剂盒中的R4作为匀浆介质按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
植物组织:用试剂盒中的R4作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、维生素E的抽提:按步骤加入样本和试剂,抽提1分钟,混匀,3500~4000转/分,离心10分钟,取上清0.8ml待测
2、显色反应:按操作表加入相应的试剂,混匀,室温静置2分钟,待测
3、533nm波长,1cm光径,无水乙醇调零比色