活性巯基(SH)主要存在于半胱氨酸,是蛋白质结构和生物体内某些氧化还原反应重要基团。在蛋白质结构中2个巯基脱氢而形成的双硫键,使相邻多肽得以连接.对于维持蛋白质完整结构十分重要。所有动物组织都含有不同量的活性巯基,机体内起重要作用的谷胱甘肽,其生理作用主要是靠所含半胱氨酸中活性巯基起还原作用。巯基还是很多酶活性基团,一些重金属盐如Hg2+等与酶巯基结合,影响酶活性。巯基化合物与机体许多机能活动,药物及毒物的作用以及某些疾病的发生发展有着密切关系。测定组织和血液中巯基含量已日益为人们所重视,以期探索对某些疾病的发生机理、治疗、预防以及预后判断等方面的研究意义。
检测原理:
5,5’-二硫代双,2-硝基苯甲酸(DTNB)与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物,可进行比色定量测定。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约30分钟,可测90例左右样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
3、再现性好:变异系数CV=1.9%
4、回收试验: X =100.3%。
试剂的组成与配制:(48T)
试剂一:标准品粉剂,3 支,4°C密封保存 6 个月。
10mmol/L 标准品贮备液的配制:每次测定前将 1 支标准品粉剂加 1ml 试剂三缓冲液溶解,即为 10mmol/L 标准品贮备液,4°C密封保存。
500μmol/L 的标准应用液的配制:10mmol/L 标准品∶试剂三缓冲液=1∶19 即 20 倍稀释配成应用液,按所需量现用现配。
试剂二:透明剂,2ml×1 瓶,4°C密封保存 12 个月(天冷时会凝固,每次测试前适当水浴加温以加速溶解,直至透明方可应用)。
试剂三:缓冲液,20ml×1 瓶,4°C密封保存 6 个月。
试剂四:显色剂,3ml×1 瓶,4°C避光保存 6 个月。
工作液一的配制:按透明剂∶缓冲液∶显色剂=1∶50∶25 的比例混合,用多少配多少。
工作液二的配制:按透明剂∶缓冲液=1∶75 的比例混合,用多少配多少。
所需仪器及自备试剂:
1、酶标仪(比色测定波长为405nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、漩涡混匀器
4、微量移液器