自备仪器和用品: 分光光度计、离心机、移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏
产品名称:单宁酶(Tannase)试剂盒说明书
产品货号:GOY-016345
检测方法:可见分光光度法 微板法
产品规格: 48样 96样
产品分类:氧化应激系列
测定步骤:产品仅用于科研
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至450nm,蒸馏水调零。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入250μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。
注意事项
1、试剂三为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?
对照管的范围是0.4-1。对照管吸光值过低可能是(1)试剂三活性低,可以适当减少稀释倍数;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂三未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。
使用说明:
样品的准备:
细胞样品的准备:对于贴壁细胞,吸净细胞培养液,用4℃或冰浴预冷的PBS或生理盐水洗涤一遍,按照每100万细胞加入100~200μL的比例加入本试剂盒提供的SOD样品制备液,适当吹打以充分裂解细胞;对于悬浮细胞,600g离心5分钟收集细胞,用4℃或冰浴预冷的PBS或生理盐水洗涤一遍,按照每100万细胞加入100~200μL的比例加入SOD样品制备液,适当吹打,以充分裂解细胞。4℃约12000g离心3~5分钟,取上清作为待测样品。
组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl,含有0.16mg/ml肝素钠)灌流清除血液后获取组织样品。取适量的组织样品,按照每10mg组织加入100μL SOD样品制备液的比例在4℃或冰浴进行匀浆(可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器)。4℃约12000g离心3~5分钟,取上清作为待测样品。
血浆或红细胞样品的准备:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。4℃ 600g离心10分钟,移取上清至另一新的1mL离心管中,适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测。红细胞样品可以参考步骤1a悬浮细胞样品的制备方法,或其它不含Triton X-100等去垢剂的样品制备方法。
上述样品准备完毕后可以用百奥莱博生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。通常10~20μg蛋白的细胞或组织匀浆液样品中的SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考)。每种样品准备20~100μg蛋白量通常已经足够用于后续检测。 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用本试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏组织10%匀浆液(组织和匀浆液的重量比为1:10)上清,通常需要稀释10~100倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70℃冻存,但建议尽量当天完成测定。
正常大鼠肾细胞;NRK桑色素(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Morin
ACVR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 细胞裂解液 (阳性对照) 沙苑子苷A(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Complanatoside A
肝动脉内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)山栀苷甲酯(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Shanzhiside methylester
Hurt-78细胞,T细胞瘤 小鼠胚胎成纤维细胞,3T3-swiss albino细胞 肺泡上皮细胞cDNAHPAEpiC cDNA商陆皂苷甲(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Esculentoside A
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤细胞) 5×106cells/瓶×2三乙酰基-β-环糊精(>97.0%(HPLC))质量规格:>97.0%(HPLC)Triacetyl-β-cyclodextrin
人胰腺型磷脂酶A2(pPLA2)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:PLA2G1B, PLA2, PLA2A, PPLA2 Human pPLA2(Phospholipase A2, Pancreas) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组pPLA2浓度
人分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:SFRP5, SARP3, secreted frizzled related protein 5 Human SFRP5(secreted frizzled-related protein 5) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组SFRP5浓度
人免疫球蛋白G3(IgG3)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:IGHG3 Human IgG3(Immunoglobulin G3) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组IgG3浓度
单宁酶(Tannase)试剂盒说明书人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:FLT3LG, Flt3-L, FL, Fms-Related Tyrosine Kinase 3 ligand Human Flt3L(FMS-like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组Flt3L浓度