实验报告：

一、HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞（高分化）)分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

ZNF253 ELISA KitRat Cav-1(Caveolin-1) ELISA Kit4-硝基苯丁酸酯组织S腺苷同型半胱氨酸核苷酶（AdoHcy nucleosidase）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

ZNF174 ELISA KitRat Lipf(Gastric triacylglycerol lipase) ELISA Kit4-硝基苯丁酸酯植物S腺苷同型半胱氨酸核苷酶（AdoHcy nucleosidase）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

ZNF259 ELISA KitRat Prss2(Anionic trypsin-2) ELISA Kit正壬醇细菌S腺苷同型半胱氨酸核苷酶（AdoHcy nucleosidase）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

ZNF18 ELISA KitRat Crhr2(Corticotropin-releasing factor receptor 2) ELISA Kit正壬醇真菌/酵母S腺苷同型半胱氨酸核苷酶（AdoHcy nucleosidase）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

ZNF271 ELISA KitRat Cat(Catalase) ELISA Kit水合茚三酮通用型细胞对氧磷酶1（PON1）有机磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒

ZNF2 ELISA KitRat Pon1(Serum paraoxonase/arylesterase 1) ELISA Kit水合茚三酮通用型组织对氧磷酶1（PON1）有机磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒

ZNF277 ELISA KitRat Mat1a(S-adenosylmethionine synthase isoform type-1) ELISA Kit1-Boc-3-吡咯烷酮通用型血液对氧磷酶1（PON1）有机磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒

ZNF195 ELISA KitRat Anxa5(Annexin A5) ELISA Kit1-Boc-3-吡咯烷酮通用型细胞对氧磷酶1（PON1）有机磷酸酶活性荧光定量检测试剂盒

NUDT2 ELISA KitFAIM1  FAS凋亡抑制分子1抗体正辛基三乙氧基硅烷左旋肉进口/国产CPI17 alpha  蛋白酸激酶PKC/CPI-17抗体含量：0.98

NUDT2 ELISA KitDEDD1  死亡效应结构域蛋白1抗体1,4,8,11-四氮杂环十四烷矢车菊-3-0-葡糖糖苷进口/国产phospho-CPI17 alpha (Thr38)   酸化蛋白酸激酶PKC/CPI-17抗体含量：HPLC≥98%

NUDT16 ELISA KitDEDD2  死亡效应结构域蛋白2抗体1,4,8,11-四氮杂环十四烷矢车菊进口/国产ADRA2  ADRA2上能受体2抗体含量：HPLC≥94%

NUAK2 ELISA KitDIS/CCAR1  细胞周期及凋亡调节蛋白1抗体3-噻吩甲醛5-羟色酸（5-HTP）进口/国产ADRB1  上能受体β1抗体含量：HPLC≥98%

NUAK2 ELISA KitDPF2/D4 zinc and double PHD fingers family 2  双PHD-D4锌指蛋白2抗体3-噻吩甲醛亥茅酚苷进口/国产APE/Girdin  肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体含量：HPLC≥98%

NUDT19 ELISA KitDUSP22/JSP1  双特异性磷酸酶22抗体1,2,3,4-四氢萘(THN)异鼠李-3-O-新橙皮苷进口/国产Drebrin  脑发育调节蛋白抗体含量：HPLC≥98%

NUB1 ELISA KitFKBP38  FK506结合蛋白38抗体牛磺酸紫蓳灵; 紫堇醇灵进口/国产DAG1  肌相关蛋白DAG1抗体含量：HPLC≥98%

NUDT21 ELISA KitFOXO1 + FOXO3 + FOXO4  叉头蛋白O1/O3/O4抗体牛磺酸高丽槐; 马卡因进口/国产ADRB2  上能受体β2抗体（β2-AR ）含量：HPLC≥98%

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。