艰难梭菌(TCD-A)核酸试剂盒实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

产品名称：艰难梭菌(TCD-A)核酸试剂盒

英文名称：详见说明书

编号：GOY-M1745

分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

产品说明书                                   1份

它具有下列特点：

1. 一管式操作，用户只需要提供样品即可。

2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物，能专一性检测出样品中的大豆成分，但不能检测其他非大豆成分。

3. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪，无需配置贵重仪器设备。

5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%，对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/μL。

6. 本只能用于科研，足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。

eIF3H  真核翻译起始因子3H抗体D-半乳糖醛酸

ELK1  细胞转录因子ELK1抗体千金藤素

Phospho-ELk1(Ser383)  磷酸化细胞转录因子ELK1抗体异亮氨酸

Phospho-ELk1 (Ser389)  磷酸化细胞转录因子ELK1抗体苯甲醛

Phospho-ELk1(Thr417)  磷酸化细胞转录因子ELK1抗体卡维丁

eIF6/ITGB4BP  β4整合素结合蛋白抗体氧化槐果碱

ITGB4  整合素β4抗体白鲜碱

phospho-ITGB4(Tyr1494)  磷酸化整合素β4抗体5-羟色胺盐酸盐

phospho-ITGB4(Tyr1526)  磷酸化整合素β4抗体烈香杜鹃油

Elastin  弹性蛋白α抗体月见草油
艰难梭菌(TCD-A)核酸试剂盒NBDX, 琥珀酰亚胺酯20mg

Shigalike toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli 0139]ApoE (Apolipoprotein E)白介素9

SHP2 peptideIKI3 family protein整合素αLIntegrin αL

SIP1 peptideILK1 (Integrinlinked protein kinase 1)干扰素α

SIRT1(sirtuin 1)Aromatase磷酸化肌醇聚磷酸盐磷酸酶样蛋白1

Skp2 peptideSPC peptide磷酸化肌醇聚磷酸盐磷酸酶样蛋白1

SLC4A4(solute carrier family 4:sodium bicarbonate cotransporter NBC1)Mast Cell Chymase抑制素βC

Slc4a7/Nbcn1(solute carrier family 4, sodium bicarbonate cotransporter, member 7)Ceruloplasmin peptide白介素16

Smac/DIABLO(the second mitochondrial activator of caspase)CKLF1抑制素βB/Inhibin β B
设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。