人成纤维细胞无血清培养基

产品基本信息

产品简介

    人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技公司（Applied Cell^TM）自主研发的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维细胞原代分离、扩增与传代培养，且不含动物血清，内毒素水平低于药典标准（<0.06EU/mL）。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。

产品特性

l 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

l 全程无血清生产，极大降低批次间差异。

l 可用于原代分离。

l 内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平。

产品内容

操作方法

人成纤维细胞传代培养：

人成纤维细胞培养基配制

1.1 37℃快速解冻人成纤维细胞培养基添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融 。

1.2将添加剂以10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基中，混匀，即为人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。混合后培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用已配制超过3周的培养基。

1.3人成纤维细胞培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的原代分离、扩增与传代培养。

操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

人成纤维细胞复苏(10cm dish)

2.1  从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞，迅速放入37℃水浴快速融解。

2.2 在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。

2.3 1000rpm 离心3 min，吸掉上清，加入10ml人成纤维细胞培养基重悬细胞。

2.4 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO₂的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。

2.5 24h后更换新鲜人成纤维细胞培养基继续培养，每2-3天更换培养液。

人成纤维细胞传代培养

1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。

2. 在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。

3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

4. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。

6. 弃上清，加入人成纤维细胞培养基，重悬细胞，计数。1：2-1：4比例传代，或按2-5x10⁴ cells/cm²  传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO₂ 培养箱中培养。

注意：人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关，所以传代时细胞密度不宜过稀。

人成纤维细胞冻存

1.  细胞达到90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS清洗一次。

2. 加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。

3. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

4.   将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。

5. 加入适量Serum-free细胞冻存液（AC-1001005/1001006），调整细胞冻存密度在1×10⁶ cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。

6. 直接放入-80℃，24h后转入液氮中长期保存。

质量控制